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高病原性ウイルス出芽機構の解明と出芽機構を標的とした抗ウイルス療法の検討

高致病性病毒出芽机制的阐明及针对该出芽机制的抗病毒治疗研究

基本信息

批准号：
15K19114
负责人：
坂部沙織
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagasaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K19114/
关键词：
高病原性ウイルス出芽 Nedd4

项目摘要

E3ユビキチンリガーゼの1つであるNedd4は、エボラウイルスやマールブルグウイルス、ラッサウイルスといった、様々な高病原性ウイルスの出芽に関与している。しかし、その詳細なメカニズムは未だ不明な点が多い。Nedd4依存的なウイルス出芽機構を明らかにするため、Flagタグを付加したNedd4発現プラスミドを293T細胞にトランスフェクションし、免疫沈降法および質量分析法により、Nedd4と相互作用する宿主因子を網羅的に同定した。同定した因子の中から14の候補因子を選抜し、それぞれの因子に対するsiRNAを用いてその発現を抑制し、エボラウイルスのVLP産生に対する影響をウェスタンブロットにより解析した。その結果、候補因子のうち、KIFF11の発現を抑制した細胞では、エボラウイルスのVLP産生が大きく抑制された。KIF11の発現を抑制した細胞では、マールブルグウイルスやラッサウイルスについても同様に、VLP産生が抑制された。また、出芽にNedd4を利用することが報告されている、水胞性口炎ウイルスを用いて、ウイルス増殖に対する影響を調べた結果、本因子の発現を抑制した細胞では、わずかながら増殖抑制が認められた。さらに、KIF11の阻害剤存在下で同様の実験を行った結果、エボラやマールブルグ、ラッサウイルスVLPの産生、およびVSVの増殖が抑制された。これらの結果から、本因子は、高病原性ウイルスの出芽に関与することが示唆された。

E3しかし、その详细なメカニズムは未だ不明な点が多い。Nedd4-dependent budding mechanisms are identified in the following ways: Flag-dependent, Nedd4-dependent, and Nedd4-dependent. The candidate factors of the same factor are selected, and the factors of the same factor are used to inhibit the occurrence of siRNA, and the VLP of the same factor is analyzed. The results, candidate factors, KIFF11 and VLP production are suppressed. KIF11 production is suppressed in cells and VLP production is suppressed. Nedd4 is used to regulate the expression of this gene. In the presence of KIF11 inhibitor, the same results were obtained, and the generation of VLP and VSV was inhibited. This factor is highly pathogenic and related to the germination of the virus.