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塩分摂取がKLHL3を調節するメカニズムの解明

阐明盐摄入调节 KLHL3 的机制

基本信息

批准号：
15K19445
负责人：
須佐紘一郎
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K19445/
关键词：
塩分感受性高血圧 WNKキナーゼリン酸化

项目摘要

本研究では、KLHL3がどのような調節を受けているかを詳細に検討し、この系の未知の部分である、塩分摂取とKLHL3を結ぶ部分の全容を解明に近づけることを目標とした。1.レニン-アンジオテンシン-アルドステロン系によるKLHL3の発現や転写の影響の解析を行った。マウスにアンジオテンシンII、アルドステロン、及びその阻害剤を投与したところ、KLHL3の蛋白発現や転写活性に明らかな変化は認めず、これらの因子にKLHL3が制御を受けるという証拠は得られなかった。2. KLHL3の機能調節へのリン酸化の関与及び生理的意義について解析した。培養細胞にWNKキナーゼとKLHL3を共発現させたうえで免疫沈降やkinase assayなどを行い検討した。この結果、KLHL3はリン酸化によってWNK4との結合能が減少すること、このリン酸化はPKA及びAktによって制御されることを解明した。これはインスリンやバソプレシンによるWNKシグナル制御の生理的メカニズムの一部分と考えられ、Biochemical and Biophysical Research Communications誌に成果を発表した。3. 腎におけるWNK-OSR1/SPAK-NCCカスケードにおいて、主にWNK1とWNK4が関与していることは確認されているものの、このどちらが支配的なのかは不明であった。そこで、WNK4ノックアウトマウスとPHAIIモデルマウスであるKLHL3(R528H/+)マウスを交配し、WNK4(-/-)KLHL3(R528H/+)マウスを作製した。このマウスはWNK1が増加していたにも関わらずOSR1、SPAK、NCCのリン酸化は著明に低下しており、WNK1単独では本カスケードを活性化できず、WNK4が活性化に必須であることを証明した。この成果については米国腎臓学会で発表し、現在投稿準備中である。

This study discusses in detail the unknown parts of KLHL3 and its regulation. 1. The analysis of the influence of KLHL3 on the development of KLHL3 KLHL3 protein production and activity are regulated by the enzyme inhibitor II, the enzyme inhibitor II, and the enzyme inhibitor II. 2. KLHL3 function regulation, acidification and physiological significance Culture of WNK and KLHL3 in vitro The results show that the binding energy of KLHL3 and WNK4 is reduced, and the binding energy of PKA and Akt is reduced. This is part of the research and development of Biochemical and Biophysical Research Communications. 3. WNK-OSR1/SPAK-NCC is the main channel for WNK1 and WNK4. KLHL3 (R528H/+) KLHL3(R528H/+) KLHL3(R528H/+) WNK1 increases in activity, WNK4 increases in activity, and WNK1 increases in activity. The results of this study were submitted to the Chinese Academy of Sciences, and are now being prepared.