腎臓オルガノイドを用いた腎線維化増悪因子の探索

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慢性腎臓病(CKD)では原疾患によらず線維化が進行するが、その機序は未解明な点が多い。腎線維化を生じる遺伝性疾患では、同じ遺伝子変異を有していても重症度の個人差が大きいことから、線維化の重症度に強い影響を与える別の修飾遺伝子の存在が疑われる。本研究では、腎臓オルガノイドを用いた網羅的なforward geneticsによって、このような腎線維化修飾遺伝子の同定を目指している。まず、目的の修飾遺伝子を探索するためのスクリーニング系の構築を行っている。線維化領域を可視化するためのfibronectin/α-SMA/COL1Aプロモーターで蛍光発色するレポーターを作製した。これらは一旦作製したものの、性能が不十分であることが判明し、再作製に取り組んでいる。また、修飾遺伝子はそれ単独で線維化を起こすわけではないため、何らかの因子により容易に線維化を起こすような背景を持つ「易線維化腎臓オルガノイドモデル」が必要となる。この易線維化腎臓オルガノイドモデルとして、CRISPR-Cas9システムによりNPHP1欠損iPS細胞の作製を行った(In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal, 2022)。また、別の易線維化モデルとして、各種線維化誘発サイトカインにより健常者由来腎臓オルガノイドを線維化させるモデルも作製した。現在、次の段階として、これらの腎臓オルガノイドを用いて線維化の修飾遺伝子をスクリーニングするための条件検討を開始している。スクリーニングに使用するFACSや、レンチウイルス型gRNAライブラリの感染効率等の条件検討を進め、候補遺伝子の絞り込みを目指す。