腎臓オルガノイドを用いた腎線維化増悪因子の探索

使用肾脏类器官寻找肾纤维化加剧因素

• 批准号: 21K08223
• 负责人: 須佐 紘一郎
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K08223/
• 关键词: 腎臓オルガノイド; 修飾遺伝子; 慢性腎臓病; 線維化

慢性腎臓病(CKD)では原疾患によらず線維化が進行するが、その機序は未解明な点が多い。腎線維化を生じる遺伝性疾患では、同じ遺伝子変異を有していても重症度の個人差が大きいことから、線維化の重症度に強い影響を与える別の修飾遺伝子の存在が疑われる。本研究では、腎臓オルガノイドを用いた網羅的なforward geneticsによって、このような腎線維化修飾遺伝子の同定を目指している。まず、目的の修飾遺伝子を探索するためのスクリーニング系の構築を行っている。線維化領域を可視化するためのfibronectin/α-SMA/COL1Aプロモーターで蛍光発色するレポーターを作製した。これらは一旦作製したものの、性能が不十分であることが判明し、再作製に取り組んでいる。また、修飾遺伝子はそれ単独で線維化を起こすわけではないため、何らかの因子により容易に線維化を起こすような背景を持つ「易線維化腎臓オルガノイドモデル」が必要となる。この易線維化腎臓オルガノイドモデルとして、CRISPR-Cas9システムによりNPHP1欠損iPS細胞の作製を行った(In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal, 2022)。また、別の易線維化モデルとして、各種線維化誘発サイトカインにより健常者由来腎臓オルガノイドを線維化させるモデルも作製した。現在、次の段階として、これらの腎臓オルガノイドを用いて線維化の修飾遺伝子をスクリーニングするための条件検討を開始している。スクリーニングに使用するFACSや、レンチウイルス型gRNAライブラリの感染効率等の条件検討を進め、候補遺伝子の絞り込みを目指す。

Chronic kidney disease (CKD) is a disease in which there are many unexplained causes of kidney disease. The severity of renal vascular diseases varies from individual to individual. The severity of renal vascular diseases varies from individual to individual. The severity of renal vascular diseases varies from individual to individual. This study is aimed at identifying the gene identity of the kidney line modification gene in forward genetics. The construction of the system is carried out in the exploration of the target modifier. Linear Dimension Visualization: Fibronectin/α-SMA/COL1A Once the system is completed, the performance is not very good. It is necessary to maintain the background of "easy to maintain linear maintenance" because it is easy to maintain linear maintenance. CRISPR-Cas9 system is used to control the production of NPHP1 deficient iPS cells (In Vitro Cellular & Developmental Biology - Animal, 2022). In addition, different types of linear maintenance are easy to achieve, and all kinds of linear maintenance are easy to achieve. Now, the next step is to start the discussion of the conditions for the use of linear dimensional modifiers. Conditions for the use of FACS, PCR and PCR for the detection of gRNA, such as infection rate, are discussed and candidate vectors are indicated.

项目成果

Generation of NPHP1 knockout human pluripotent stem cells by a practical biallelic gene deletion strategy using CRISPR/Cas9 and ssODN

• DOI: 10.1007/s11626-022-00655-0
• 发表时间: 2022-02-14
• 期刊: IN VITRO CELLULAR & DEVELOPMENTAL BIOLOGY-ANIMAL
• 影响因子: 2.1
• 作者: Nakano, Yuta;Susa, Koichiro;Sohara, Eisei
• 通讯作者: Sohara, Eisei

Absence of ULK1 decreases AMPK activity in the kidney, leading to chronic kidney disease progression

• DOI: 10.1111/gtc.12989
• 发表时间: 2022-11
• 期刊: Genes to Cells
• 影响因子: 2.1
• 作者: Tomoki Yanagi;Hiroaki Kikuchi;K. Susa;Naohiro Takahashi;Hiroki Bamba;Takefumi Suzuki;Y. Nakano;Tamami Fujiki;Yutaro Mori;Fumiaki Ando;Shintaro Mandai;Takayasu Mori;Koh Takeuchi;S. Honda;S. Torii;S. Shimizu;T. Rai;S. Uchida;E. Sohara

ULK1-Regulated AMP Sensing Mechanism by AMPK Is Disrupted in CKD

AMPK 调节 ULK1 的 AMP 传感机制在 CKD 中被破坏

• 发表时间: 2022
• 作者: Tomoki Yanagi;Hiroaki Kikuchi;Koh Takeuchi;Koichiro Susa;Naohiro Takahashi;Yuta Nakano;Fumiaki Ando;Shintaro Mandai;Takayasu Mori;Shinya Honda;Satoru Torii;Shigeomi Shimizu;Tatemitsu Rai;Shinichi Uchida;Eisei Sohara
• 通讯作者: Eisei Sohara