权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

転写因子を用いた高効率in vivo 造血幹細胞分化誘導法

使用转录因子的高效体内造血干细胞分化诱导方法

基本信息

批准号：
15K19553
负责人：
二井偉暢
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K19553/
关键词：
ヒトES細胞ヒトiPS細胞造血幹細胞遺伝子導入テラトーマ

项目摘要

研究代表者はテラトーマ形成法と遺伝子導入法を組み合わせ、ヒトES/iPS細胞から高効率に造血幹細胞を分化誘導する方法の確立を試みた。研究代表者は研究期間内に①ヒトES/iPS細胞への候補遺伝子群の導入とテラトーマ形成、及び②ヒトCD34陽性細胞分画の解析を行った。①当研究室でヒト末梢血単核細胞から樹立したiPS細胞、及びWiCell Research Instituteより購入したヒトES細胞に申請書に示した候補遺伝子群を導入した。研究代表者はヒトES/iPS細胞をフィーダーフリー培養環境下で単一分散培養を行ない、遺伝子導入効率が90％以上と高い効率を示す方法を確立した。最もヒト細胞の生着の良いNOGマウスの下肢に遺伝子導入したヒトES/iPS細胞（100万細胞前後）を移植しテラトーマ形成を行った。コントロールとしてGFP発現ベクターを遺伝子導入した。また、遺伝子導入ベクターとしてエピソーマルベクターの利用の検討も行った。②テラトーマ形成後、テラトーマをマウス下肢より取り出し、トリプシン及びコラゲナーゼ処理を行なうことにより単一細胞にし、テラトーマ内のヒトCD34陽性細胞の分画をフローサイトメトリーで確認した。GFPを導入したヒトES/iPS細胞由来のテラトーマからはヒトCD34陽性細胞は確認できなかった。しかし、候補遺伝子導入群ではヒトCD34陽性細胞が低効率ではあるが確認された。

The researchers tried to establish a method for inducing hematopoietic stem cell differentiation by using the gene transfer method and the ES/iPS cell differentiation method. The study representatives conducted the introduction and formation of candidate subsets of ES/iPS cells and the analysis of CD34-positive cell profiles during the study period. 1. When the peripheral blood mononuclear cells were established in the research laboratory, and the ES cells were purchased by the WiCell Research Institute, the candidate cells were introduced. The research representative established a method for the establishment of a single dispersion culture system for ES/iPS cells in a culture environment, with a high efficiency rate of over 90%. The most advanced cells are born in NOG and their lower limbs are introduced into ES/iPS cells (around 1 million cells). The GFP gene was introduced into the genome. The use of the information is discussed in detail. 2. After the formation of the tumor, the tumor was removed from the lower limb, and the tumor was treated with single cell, tumor and CD34 positive cells. GFP was introduced into ES/iPS cells and CD34 positive cells were identified. CD34-positive cells were identified at a low rate.