糞線虫寄生世代メスの単為生殖における精子非依存性極性形成機構の解明

阐明类圆线虫寄生雌性孤雌生殖过程中不依赖精子的极性形成机制

基本信息

  • 批准号:
    16K19115
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.58万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
  • 财政年份:
    2016
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2016-04-01 至 2019-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

動物寄生性線虫である糞線虫の宿主寄生ステージは単為生殖によって発生する。すなわち、卵が精子を用いずに発生を進行させることが可能である。申請者は、単為生殖を行う卵が精子を用いずに卵内の極性を形成するメカニズムの解明を目的とした研究を行った。まず、C. elegansの卵でanterior側またはposterior側に局在することが知られているProtein kinase C (PKC)-3 やPartitioning defective protein (par) -6 と相同性の高い分子を糞線虫ゲノム情報から見出した。これらの分子を蛍光標識し、その動態を追うことで極性形成のモニタリングが可能であると考えた。そこで、CRISPR/Cas9系を用いた遺伝子組換え系の確立を試みた。核酸の導入は、自由生活世代メスへのマイクロインジェクション法により行うこととした。糞線虫自由生活世代は、糞感染ラットの糞便を寒天培地上で;培養することによって得られるが、感染ラットの維持が困難であることから、in vitro培養によって自由生活型世代虫体を得ることを試みた。C. elegansの感染型幼虫誘導阻害物質であるdelta7ダファクロン酸(d-DA)を有性生殖後に発生する卵に加えて培養することで、感染型虫体への成長が阻害され次世代の成虫体が得られると考えた。有性生殖後に発生する卵をd-DA(500 nM) を添加した糞便融解液中で培養したところ、培養2日後体長1 mm体幅50 μmの虫体が見られた。この虫体は腸管及び生殖腺が発達しており、産卵口の形成も見られた。これらは自由生活世代雌の特徴と一致していた。一方で、d-DAを加えない培養では全ての虫体が感染型幼虫に発育した。 以上の結果から、糞線虫のin vitro培養の可能性が示唆された。
Animal parasitic nematodes である fecal nematodes parasitize the host ステ ジ ジ 単 単 for reproduction によって occurrence する. Youdaoplaceholder0, egg が sperm を can be produced by すなわち ずに and を, and させる とが とが may である. Applicants は, が 単 for germ line を う eggs, sperm を with い ず に の polarity within eggs を form す る メ カ ニ ズ ム の interpret を purpose と し た を line っ た. ま ず, c. elegans の eggs で anterior lateral ま た は posterior lateral に bureau in す る こ と が know ら れ て い る Protein kinase C (PKC) - 3 や Partitioning defective Protein (par) - 6 Youdaoplaceholder0 homologues of high-と molecules を fecal nematodes ゲノム intelligence ら ら reveals た た. Molecular を こ れ ら の 蛍 light identification し, そ の dynamic を chase う こ と で polarity formation の モ ニ タ リ ン グ が may で あ る と exam え た. Youdaoplaceholder0 を で で and the CRISPR/Cas9 line を were replaced with the 伝 subsets of the た た residue by the え line <s:1> to establish the を test みた. Nucleic acid testing is introduced to メスへ, and for the free-living generation, メスへ ロ ロ ロ ジェ ジェ ショ ショ. The によ <s:1> method is used to conduct う う とと とと た た た. Fecal nematodes live freely for generations ラット, fecal infection ラット, fecal を, cold-weather cultivation on the ground で; Cultivate す る こ と に よ っ て have ら れ る が, infection ラ ッ ト の difficulty maintaining が で あ る こ と か ら, in vitro cultivation に よ っ て free life generation worm を must る こ と を try み た. C. elegans の larvae induced resistance against infection type material で あ る delta7 ダ フ ァ ク ロ ン acid (d - DA) を sexual reproduction after に 発 raw す る eggs に plus え て cultivate す る こ と で, infection type worm へ の が growth resistance against さ れ nextgen の adult body が have ら れ る と exam え た. Born after sexual reproduction に 発 す る eggs を d - DA (500 nM) を add し た waste melting liquid で cultivate し た と こ ろ, cultivating 2 1 mm body length in the future of 50 microns の worm が see ら れ た. The <s:1> intestinal tract and び gonadal glands of the <s:1> worm が reach the <s:1> てお and the ovipositor gland form a common occurrence られた. The <s:1> characteristics of the liberal-free generation are と consistent with と て た た た た. One party で, d-DAを plus えな えな culture で た whole て sequeae が infected larvae に develop た. The above <s:1> results が ら and the possibility of fecal nematode <s:1> in vitro culture が suggest された.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Phylum-wide genome survey for Major Sperm Protein (MSP) genes in nematodes
线虫主要精子蛋白 (MSP) 基因的全门基因组调查
  • DOI:
  • 发表时间:
    2016
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Akina Hino;Asuka Konosu;Nobuo Ohta;Taisei Kikuchi
  • 通讯作者:
    Taisei Kikuchi
単為生殖を行う線虫におけるMajor Sperm Protein (MSP)の解析
孤雌生殖秀丽隐杆线虫主要精子蛋白 (MSP) 的分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2017
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    熊谷祐也;田上貴祥;奥山正幸;木村淳夫;日野明紀菜・鴻巣明日香・菊地泰生・太田伸生
  • 通讯作者:
    日野明紀菜・鴻巣明日香・菊地泰生・太田伸生
Comparative transcriptomics gives insights into the evolution of parasitism in Strongyloides nematodes at the genus, subclade and species level.
  • DOI:
    10.1038/s41598-018-23514-z
  • 发表时间:
    2018-03-26
  • 期刊:
  • 影响因子:
    4.6
  • 作者:
    Hunt VL;Hino A;Yoshida A;Kikuchi T
  • 通讯作者:
    Kikuchi T
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日野 明紀菜其他文献

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