ソノポレーションを応用した難治性口腔粘膜疾患の治療に関する基礎的検討

声孔治疗难治性口腔黏膜疾病的基础研究

基本信息

批准号：
16K20606
负责人：
大澤賢次
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Kyushu Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-01 至 2018-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K20606/
关键词：
ソノポレーション口腔粘膜疾患口腔扁平苔癬遺伝子導入

项目摘要

まず、本研究計画の臨床的背景を補うため、口腔扁平苔癬の原因の一つとして考えられている歯科材料アレルギーの原因検査方法として一般に行われているパッチテストについて、本学付属病院受診患者でパッチテストを受けた患者の統計学的検討を行った。受診患者は女性が多く，60歳代の患者が最も多かった。受診動機は扁平苔癬様の口内炎が最も多かった。感作陽性率は60.1%であり，男性よりも女性が高かった。各検査項目別の陽性率では，ニッケルが最も高くかった。受診動機別の陽性率では，過去に皮膚症状があった患者における陽性率が最も高く，口腔扁平苔癬患者は約半数がパッチテスト陽性であった。また、ソノポレーションを応用したin vivo口腔粘膜遺伝子導入実験系と評価系の確立のためと遺伝子導入効率の上昇に関する確認のための検討として、実験を行った。まず、マウスの後肢骨格筋に対して、ヘビ毒を注入して筋損傷を誘発した群と筋損傷を誘発しない群の2群に分け、それぞれ超音波遺伝子導入法により緑色蛍光タンパク(GFP)発現プラスミドベクターを導入し、導入効率を蛍光顕微鏡にて評価した。結果、筋損傷を誘発した群では筋損傷を誘発しない群と比較して、GFPの発現が上昇していた。つぎに、同様の実験系において、それぞれヒト骨形成因子(BMP2)発現プラスミドベクターを導入し、骨誘導能について軟X線、マイクロCT撮影、および組織学的解析を行った。筋損傷を誘発した群では、筋損傷を誘発しない群と比較してBMP2遺伝子発現の結果である筋組織内における異所性の骨形成がより顕著に確認された。以上より口腔粘膜へも同様の手法で、反復して薬剤投与する等の方法で遺伝子導入効率を上げられる可能性が示唆された。以上の結果をもとに、引き続き炎症を亢進させるNF-κBシグナルを抑制するベクターを導入する実験を進めていたが研究者の転出のため、実験を中止した。

首先，为了弥补本研究计划的临床背景，我们对经过斑块测试的患者进行了统计检查，这些患者通常用作牙科材料过敏原因的测试，这被认为是与我们大学隶属于医院的患者。参观的大多数患者都是女性，是60多岁的患者。访问诊所的最常见动机是地衣披针状的口腔口腔炎。敏化正率为60.1％，女性高于男性。镍是每个测试项目的正率中最高的。检查动机的正率表明，先前皮肤症状的患者的正率最高，大约一半的口服地衣披披un骨患者进行了阳性贴剂测试。此外，还进行了实验，以建立一个使用Sonoporation的体内口服粘膜基因转移实验和评估系统，并确认基因转移效率的提高。首先，将小鼠分为两组：一组注射蛇毒物以诱导肌肉损伤，一组不诱导肌肉损伤。通过超声基因转移引入了绿色荧光蛋白（GFP）表达质粒载体，并通过荧光显微镜评估小鼠的引入效率。结果，与未诱导肌肉损伤的组相比，该组中GFP的表达增加了。接下来，在类似的实验系统中，引入了人骨形成因子（BMP2）表达质粒载体，并对骨诱导能力进行了软X射线，MicroCT成像和组织学分析。在诱导肌肉损伤的组中，肌肉组织中的异位骨形成是BMP2基因表达的结果，比没有诱导肌肉损伤的组更为明显。从以上，已经提出，可以使用相同的方法（例如在口服粘膜中的药物重复给药）来提高基因转移的效率。基于上述结果，我们继续进行实验，以介绍抑制增加炎症的NF-κB信号的向量，但由于研究人员的转移而停止了实验。