転写因子HOXD9が子宮頸部腺癌の悪性形質に関与する分子機構の解明と治療法の開発

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昨年に引き続き、HPV18型陽性の子宮頸癌におけるHOXD9の検討を行った。HOXD9がHPV18型陽性の子宮頸癌に与える分子生物学的影響を検討するため、Hela細胞とSKG1細胞でHOXD9遺伝子を抑制し、E6遺伝子、P53遺伝子およびP53タンパクの発現を検討した。HOXD9を抑制すると2つの細胞株ともに、E6遺伝子発現が著名に抑制され、P53遺伝子の発現は変化なかったが、P53タンパクの発現は増強した。これらのことから、HOXD9はHPV18方型のE6遺伝子の発現を抑制することでP53遺伝子の分解を抑制することが示唆された。HPV18型でのE6/E7遺伝子のプロモーターであるP105プロモーターについて、プロモーーアッセイを実施するため、pGL3-P105プラスミドを作成し、 HPV18型陽性細胞株であるHeLa株およびSKG-I株に導入して、HOXD9によってP105プロモーターが制御されているか検証を行った。HOXD9遺伝子を抑制すると、ルシフェレース活性が顕著に低下し、P105プロモーターが抑制されたことが示唆された。次にHela株を用いたChip assayを行った。actin標識したHOXD9タンパクをHela細胞に導入して強制発現させ、抗actin抗体で沈殿させるとP105プロモーターが沈殿した。このことから、HOXD9はP105プロモーターに直接結合して発現を制御することが判明した。