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脱皮不全系統のカイコを用いたエクジソン中間体の探索

利用蜕皮缺陷品系的蚕寻找蜕皮激素中间体

基本信息

批准号：
26850070
负责人：
伊賀正年
金额：
$ 2.5万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

最終年度はエクジソン生合成経路のブラックボックスの解明に向け、ブラックボックス内の反応に関わる酵素であるNm-gの変異個体から見出した未知物質Xの構造解析、Nm-g変異個体の前胸腺における遺伝子発現解析と基質変換実験、新規エクジソン生合成酵素の探索、ならびに機能未知のエクジソン生合成酵素であるSpookのノックアウトカイコ作出を行った。昨年度Nm-g変異個体の体液から精製を終えた未知物質Xを用いて、NMRによる構造解析を行った。これまでに取得した類縁化合物や既知エクジソン中間体の合成品のNMRスペクトルとの比較により、未知物質Xの構造を決定することが出来、Nm-g機能の解明に繋がる重要な知見を得た。また、Nm-g変異個体の前胸腺において既知エクジソン生合成酵素遺伝子が発現しており酵素活性を有すること、ならびにNm-g変異系統のカイコ前胸腺を用いた標識体コレステロールの変換実験により未知物質Xはエクジソンと同じくコレステロールを原料に前胸腺で合成された物質であることがわかった。加えて、Nm-gとSpook以外の酵素がブラックボックス内の反応に関わる可能性についても検討を行い、次世代シーケンサーを用いたカイコ前胸腺トランスクリプトーム解析により新規のエクジソン生合成酵素候補遺伝子を見出すことに成功した。この候補遺伝子の前胸腺における遺伝子発現パターンは体液中エクジステロイド量の変化と相関が見られ、エクジソン生合成への関与が示唆される。また、変異系統が存在しないSpookについてはゲノム編集法を用いてノックアウトカイコを作出した。これまでに複数の変異導入個体が確認出来ており、今後の解析により新たな知見が得られることが期待される。本研究によりこれまで不明であったエクジソン生合成経路のブラックボックスの一部が明らかとなり、全容解明に向けた基盤を構築することが出来た。

In the final year, the structure analysis of the unknown substance X, the analysis of the gene expression of the Nm-g variant, the matrix transformation, the new regulation, the exploration of the enzyme related to the biosynthesis of the Nm-g variant, the discovery of the enzyme related to the biosynthesis of the Nm-g variant, the discovery of the enzyme related to the biosynthesis of the Nm-g variant, and the discovery of the enzyme related to the biosynthesis of the Nm-g variant. The function of the enzyme is unknown. Nm-g, Nm-g. This is an important insight into the structure determination of unknown substance X and the elucidation of the function of Nm-g. The enzyme activity of the prethymus of the Nm-g variant is detected by the enzyme activity of the prethymus of the known Nm-g variant. The enzyme activity of the unknown substance X is detected by the enzyme activity of the known Nm-g variant. Add to the list, Nm-g and Spook enzymes in the opposite direction, the possibility of the search, the next generation of the search, the use of the search, the analysis of the new rules of the search, the synthesis of enzymes candidate list found successfully. The candidate gene is found in the anterior thymus, and the candidate gene is found in the body fluid. There are different kinds of systems in the world. This is the first time that we've ever seen a person who's been introduced into the world, and we've been looking forward to seeing them. In this research, it is revealed that part of the complex and complex biosynthetic circuit is clearly defined, and the foundation for a comprehensive understanding of the direction is built.

项目成果

期刊论文数量（4）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

変異系統のカイコに含まれるステロイド類の分析によるNm-g機能の探索

通过分析突变蚕品系中的类固醇探索Nm-g功能

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
伊賀正年;中村立樹;齋藤一樹;木内信;石神健;藤本善徳;片岡宏誌
通讯作者：
片岡宏誌

昆虫の脱皮ホルモン生合成経路の全容解明に向けて

彻底阐明昆虫蜕皮激素生物合成途径

DOI：
发表时间：
2015
期刊：
影响因子：
0
作者：
Masatoshi Iga;Hiroshi Kataoka;Huwei Sun; Yang Bi; Jinyuan Tao; Shuangjie Huang · Mengmeng Hou · Ren Xue · Zhihao Lian; Pengyuan Gu; Koichi Yoneyama; Xiaonan Xie; Qirong Shen; Guohua Xu; Yali Zhang;伊賀正年
通讯作者：
伊賀正年

エクジソン生合成に関わる新規酵素の探索

寻找参与蜕皮激素生物合成的新酶