SLCO2A1遺伝子変異による小腸潰瘍症のメカニズム追究

探究SLCO2A1基因突变引起小肠溃疡病的机制

• 批准号: 26860524
• 负责人: 島村 克好
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26860524/
• 关键词: 非特異性多発性小腸潰瘍症; SLCO2A1

1.正常および変異型強制発現細胞株の樹立遺伝子の完全長cDNAクローンー005630.1を哺乳類細胞発現べクターpCMV6-ACにサプクローニングした.完成した正常型の発現べクターに対して各変異型になるよう設計したプライマーによるinversePCRを行うことで患者に認められる全ての変異型の発現べクターを作製た.Humanembryonickidney293(HEK293)培養細胞に遺伝子導入試薬を用いてこれらべクターをトランスフェクションし、48時間培養後実験に供した.2.強制発現株を用いた正常およひ変異型SLC02A1のPGE輸送機能の解析正常および変異型SLCO2A1遺伝子を発現させたHEK細胞に,3H標識されたPGEを取り込ませ,一定時間培養後に細胞を溶解して液体シンチレータと混合,液体シンチレーションカウンター(パーキンエルマーTri-Carb3100)で放射線をカウントすることでPGEの輸送能を測定した.正型遺伝子を発現させたHEK細胞と比較して,変異型SLC02A1遺伝子を発現させたHEK細胞では著しくPGEの輸送能が低かった.3.Cre-loxPシステムを用いた血管内皮特異的slco2a1欠損マウスの作製KnockoutMouseProject(KOMP)RepositoryよりKOMP-CSD ID:79483を人手し,loxP系統を得た.これをVE-Cadherin-Cre系統と交配中である.血管内皮特異的slco2a1欠損マウス系統を樹立した.

1. The complete cDNA sequence of the normal and heteromorphic stress-developing cell lines was 005630.1. Mammalian cells developed pCMV6-AC. Complete the design of inversePCR for the detection of normal type DNA for each variant. Humanembryonickidney 293 (HEK293) Cultured cells for the detection of DNA for each variant. After 48 hours of culture, the cells were lysed. 2. Stress developed cells were used to analyze the PGE transport function of normal and abnormal SLCO2A1 cells. 3H identification of PGE was used to detect HEK cells. After a certain period of culture, the cells were lysed and mixed. Determination of the transport energy of PGE HEK cells showed low PGE transport capacity when positive genes were detected.3.Cre-loxP system was used to detect endothelial specific slco2a1 deficiency in the Knockout MouseProject (KOMP)Repository, KOMP-CSD ID:79483. VE-Cadherin-Cre system Vascular endothelium-specific slco2a1 deficiency is established.

项目成果

A Hereditary Enteropathy Caused by Mutations in the SLCO2A1 Gene, Encoding a Prostaglandin Transporter.

• DOI: 10.1371/journal.pgen.1005581
• 发表时间: 2015-11
• 期刊: PLoS genetics
• 影响因子: 4.5
• 作者: Umeno J;Hisamatsu T;Esaki M;Hirano A;Kubokura N;Asano K;Kochi S;Yanai S;Fuyuno Y;Shimamura K;Hosoe N;Ogata H;Watanabe T;Aoyagi K;Ooi H;Watanabe K;Yasukawa S;Hirai F;Matsui T;Iida M;Yao T;Hibi T;Kosaki K;Kanai T;Kitazono T;Matsumoto T
• 通讯作者: Matsumoto T