腎集合管主細胞におけるH^+感受性レセプターのクローニング

肾集合管主细胞H^+敏感受体的克隆

• 批准号: 08877178
• 负责人: 池田 雅人
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Jikei University School of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877178/
• 关键词: tyrosine kinase; cloning; pH; Cloning

生体はpHに反応し、細胞単位で様々な代謝の変化が誘導される。腎集合管は最終尿pHを規定する分節として重要である。最近、我々はアルカリにより転写亢進する腎集合管のタンパクについて報告した。この転写亢進はチロシンキナーゼ阻害薬により消失することから、腎集合管主細胞には、チロシンキナーゼドメインを内在するH^+感受性レセプターが存在すると考え、クローニングを試みた。以下に現在までの研究概要を記す。1.細胞培養:SV40で形質転換した3-6世代の兎腎集合管主細胞の培養細胞を用いた。2.mRNA抽出、RT-PCR:チロシンキナーゼドメインの保存領域に村応するdegenerative primerを作成し、得られたpoly(A)^+mRNAからRT-PCRを行った。期待される約200bpのPCR productをPCRTMII vector(Invitrogen)に導入し、ジデオキシ法により塩基配列を決定した。3.得られたprotein kinase domainを有する2クローンについて、RACE法によりfull-length cDNAを得た。1264アミノ酸からなる6回膜貫通型タンパクであった。4.Xenopus oocyteに上記クローンのcRNAをtransfectionし、細胞外pH依存性のprotein kinase activityの変化を確認中だが、現在までpH依存性は認められていない。

The <s:1> pHに of organisms is anti応 応, and the 単 of cells で -like 々な metabolic <s:1> changes が induce される. The renal collecting duct を final urine pHを stipulates する segments と て て important である. Recently, I 々 は ア ル カ リ に よ り planning write hyperthyroidism す る renal collecting duct の タ ン パ ク に つ い て report し た. こ の planning write hyperthyroidism は チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ resistance against 薬 に よ り disappear す る こ と か ら, renal collecting duct cells に は, チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ ド メ イ ン を inner す る H ^ + susceptibility レ セ プ タ ー が exist す る と え test, ク ロ ー ニ ン グ を try み た. The following に presents the まで まで research summary を records す. 1. Cell culture :SV40で shape and plasmid 転 are exchanged for <s:1> た master cells of the renal collecting duct of 6-generation <s:1> rabbits <s:1> for cell culture を with た た. 2. MRNA extraction, rt-pcr: チ ロ シ ン キ ナ ー ゼ ド メ イ ン の に village preservation field 応 す る degenerative primer を し consummate, and ら れ た poly real ^ + (A) mRNA か ら rt-pcr を line っ た. It is expected that approximately される 200bp of the <s:1> PCR productをPCRTMII vector(Invitrogen)に will be introduced, ジデ ジデ キシ will be used by キシ, and the によ base arrangement を will determine the た. 3. To ら れ た protein kinase domain を have す る 2 ク ロ ー ン に つ い て, RACE に よ り full - length cDNA を た. 1264ア ア ノ acid らなる らなる6 through-membrane type タ であった パ であった であった. 4.Xenopus oocyteに is recorded as <s:1> ロ <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> cRNAをtransfection <e:1>, extracellular ph-dependent <s:1> protein kinase activity <e:1> changes を confirmation in だが, now まで ph-dependent <s:1> recognition められて な な な な な だが.

项目成果

Masato Ikeda,et al.: "Transcriptional activation of RACTK1 K^+ channel gene by apical alkalization in renal cortical collecting duct cells." J.Clin.Invest.98. 474-81 (1996)

Masato Ikeda 等人：“肾皮质集合管细胞中顶端碱化对 RACTK1 K^ 通道基因的转录激活”。

Masato Ikeda,et al.: "Transcriptional activation of RACTK1K^+ channel gene by apical alkallzation in renal cortical collecting duct cells." J.Clin.Invest.98. 474-81 (1996)

Masato Ikeda 等人：“肾皮质集合管细胞中顶端碱化对 RACTK1K^ 通道基因的转录激活”。