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がん個別化放射線治療法の確立に向けたTR研究

TR 研究旨在建立个性化癌症放射治疗

基本信息

批准号：
21KK0144
负责人：
原田浩
金额：
$ 12.23万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-10-07 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21KK0144/
关键词：
がん放射線治療微小環境低酸素

项目摘要

細胞の低酸素応答を担うマスター転写因子としてHIF-1とそのアイソフォームHIF-2などが知られている。しかし、これらHIFsを全てノックアウトした状況においても、低酸素刺激を受けた細胞内で低酸素誘導性遺伝子の発現が誘導されることが確認されており、HIFs以外の低酸素誘導性転写因子の存在が示唆されている。この状況下、SPINK1遺伝子の低酸素依存的な発現を担う責任因子をゲノムワイドにスクリーニングする目的で実験を展開した。具体的には、SPINK1プロモーターの制御下で蛍光タンパク質を発現する細胞株の樹立を進め、CRISPR/Cas9システムを駆使したノックイン法で、当目的とする遺伝子組み換え細胞を樹立するためのターゲティングベクターを作成し、その活性を検証する実験を実施した。一方、血中のSPINK1を特異的かつ高感度に検出する系を確立することを目的に、ELISA系を確立し、培養細胞の培養上清や担癌マウスの血漿を対象とした実験を実施して、実験系を最適化した。この実験系を活用して、複数がん種の担癌マウスを対象にした実験を実施し、移植腫瘍内低酸素画分と血漿内SPINK1濃度が正に相関することを確認した。これまでに得た研究成果を基に、in vitro・in vivo実験に加えて、ヒトを対象にした研究を展開すべく、所属機関の倫理委員会でがん患者由来サンプルを用いた研究を実施する倫理審査を受け、承認を受けた。

The expression of HIF-1 and HIF-2 in cells is related to the expression of HIF-1 and HIF-2. The presence of hypoacid-inducible factors other than HIFs was confirmed in the presence of hypoacid-inducible genes induced in cells stimulated by hypoxia. In this case, the SPINK1 gene is responsible for the development of low acid dependent genes. Specifically, SPINK1 is controlled by the CRISPR/Cas9 system, which is used to establish cell lines, and the CRISPR/Cas9 system is used to establish cell lines. A specific SPINK1 in the blood was used to establish the high sensitivity detection system, the ELISA system was established, the culture supernatant of the cultured cells and the plasma was used to optimize the detection system. The results showed that there was a positive correlation between the concentration of SPINK1 in the plasma and the concentration of low acid in the transplanted tumor. The results of this study are based on, in vitro, in vivo, in