栽培化は種子微生物叢をどう変化させたか：東アジア起源のダイズを材料とした検討

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本年度は、ツルマメ及びダイズの種子微生物叢を分析するための材料・方法を検討すること、研究体制や採集地を検討・確認することを目的とした。予備解析を行うため、滋賀県内の畑地2箇所で育ったダイズを、乾燥後、鞘に入った状態で生産者から提供を受けた。また、京都府および滋賀県内のいくつかの候補地でツルマメの生息地の探索を行い、滋賀県草津市・京都市においてツルマメを採集した。京都府で見られた生息地では種子が散布された後だったものの、滋賀県の生息地では十分量のサンプルを得ることができた。これらのサンプルを蒸留水に浸し柔らかくしたあとパワーマッシャーで粉砕し、濃度を変えた懸濁液を塗布したR2A寒天培地を28度の培養器の中に1週間おいて細菌の培養を試みた。色や形態で識別可能な多数のコロニーを得ることができ、ダイズ・ツルマメ両方ともに多くの培養可能な細菌を含んでいること、細菌叢を十分分析できそうであることを確認した。さらに、ダイズ・ツルマメからの微生物DNAの抽出について予備実験を行った。ダイズ及びツルマメを、パワーマッシャーSPを用いて粉砕し、キアゲンのDNeasy PowerSoil Proのキットを用いて微生物DNAを抽出した。抽出後サンプルは－20度で保存した。これらのサンプルは、2023年度に細菌特異的に増幅できる335F/796Rプライマーペアを用いてイルミナNova Seqのペアエンド・アンプリコンシーケンスを行い、微生物叢を特定する予定にしている。そのほか、分担者・大学院生1名が香港の共同研究者のもとを訪れ、実験設備の確認・研究打ち合わせを行った。