骨格筋レナラーゼ欠損における骨格筋可塑性の変化と筋収縮による分泌・発現応答の検証

验证骨骼肌肾酶缺乏症中肌肉收缩引起的骨骼肌可塑性以及分泌和表达反应的变化

• 批准号: 22KJ3228
• 负责人: 時野谷 勝幸
• 金额: $ 0.25万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ3228/
• 关键词: renalase; 筋収縮; 培養細胞; 電気刺激

レナラーゼというシグナルペプチドを持つ分子に着目し、骨格筋での生理的な役割について実験を行った。昨年度の研究遂行中に、検出する抗体に問題が生じている可能性があるため、販売されている既存の抗体ではなく、抗体の作成を業者に依頼し、作成中となった。作製された抗体をウエスタンブロッティング法によって、目的の分子量に結果が得られるか、検討した。ポジティブコントロールであるレナラーゼ過剰発現のバンドは得られた一方で、ネガティブコントロールの検討が行えていない状態である。加えて、過剰発現したレナラーゼは、ヒトのアミノ酸配列であるため、今後マウス由来の過剰発現サンプルを使用する予定である。以上より、抗体の信頼性を完全には担保できない結果となった。今後は、レナラーゼ欠損マウスから抽出したタンパクと、過剰発現のサンプルを用いて再度検出を試みる予定である。また培養細胞実験に加えて、マウスの実験も遂行した。昨年度にレナラーゼを全身で欠損したマウスを筑波大学より譲渡して頂き、繁殖中であった。しかし、施設の不具合等も遂行期間中に発生し、繁殖が思うように進めることができなかった。しかしながら、野生型マウスとレナラーゼ欠損マウスを同腹仔で得られ他ので、単一筋線維から遊走した筋芽細胞の増殖能を検討した。また骨格筋組織を取り出して、長趾伸筋（速筋線維）およびヒラメ筋（遅筋線維）の発揮張力を測定した。増殖能の結果は、n数が少ないため、今後も検討する必要がある。また発揮張力の結果は、レナラーゼ欠損マウスのヒラメ筋において、野生型と比較して、減少する可能性が見られた。この結果もn数が少なかったため、今後n数の増加が必要となる結果となった。

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