Effective Control of Dengue Vector Mosquitoes Utilizing Viral Resistance Genes

利用病毒抗性基因有效控制登革热媒介蚊子

• 批准号: 22KK0060
• 负责人: 渡辺 幸三
• 金额: $ 12.9万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Fund for the Promotion of Joint International Research (Fostering Joint International Research (B))
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-10-07 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KK0060/
• 关键词: デング熱; 東南アジア; ネッタイシマカ; ゲノム; 遺伝子

今年度は、以下二つの研究項目を中心に研究を進めた。研究項目１（蚊ゲノムのウイルス抵抗性遺伝子の網羅的探索）：CRISPR-Cas9でネッタイシマカの遺伝子を欠損させたネッタイシマカ培養細胞ライブラリーの構築のために、まずAag2細胞に感染するレトロウィルスを産生できるレトロウィルスベクターの系構築に着手した。まず、プロモーターIE1を有するプラスミドPIExを蚊の細胞（Aag2、C6/36）と哺乳類の細胞（BHK、vero）の両方にトランスフェクトした。その結果、蚊の細胞で緑色蛍光色素(GFP)の発現が確認された。次に、プライマーを設計し、逆転写PCRとInFusion HDクローニングによりIE1プロモーターをレトロウイルスベクターpRetroQ-AcGFP1-C1にクローニングした。このIE1プロモーターを持つ改変pRetroQ-AcGFP1-C1をトランスフェクションしたが、Aag2細胞ではGFPの発現が見られなかった。今後、クローニングやリピートクローニングのために設計したプライマーを変更したり、クローニングしたプラスミドの濃度を変えてトランスフェクションを行う必要があると考えられる。研究項目２（蚊地域集団のウイルス抵抗性遺伝子の多様性評価）：フィリピンのマニラ首都圏とインドネシアのジョグジャカルタでネッタイシマカを採取した。各世帯の屋内に誘虫紫外線ランプと吸引ファンを備えた電動蚊採捕機を設置し、デング熱が流行する雨季に採取した。採取した蚊標本は実体顕微鏡下で種を同定して、マイナス２０度の冷凍庫内に保存をした。

This year, the following two research projects will be carried out. Project 1: CRISPR-Cas9 gene expression system was constructed by cell culture and infection of Aag2 cells. In addition, PIEx cells (Aag2, C6/36) and mammalian cells (BHK, vero) are also included in the list of possible responses. As a result, the development of green fluorescent pigment (GFP) in mosquito cells was confirmed. Next, the software design, reverse write PCR and InFusion HD software design, IE1 software design, retroQ-AcGFP1-C1 software design The IE1 cell was found to be defective when pRetroQ-AcGFP1-C1 was removed from the cell. In the future, the design will be changed to the thickness of the design. Project 2 (Diversity Assessment of Resistance Genes in a Regional Cluster): The Development of a Community of Species and the Development of Community of Species All kinds of indoor UV light traps are set up in the rainy season. The seeds were stored in a refrigerator at 20 degrees Celsius under microscope.

项目成果

Viral DNA forms of cell-fusing agent virus (CFAV) are produced in Aedes aegypti mosquito in vitro and in vivo

细胞融合剂病毒 (CFAV) 的病毒 DNA 形式在埃及伊蚊体内和体外产生

• 发表时间: 2022
• 作者: Mohammad Mosleh UDDIN;Yasutsugu SUZUKI;Takahiro SUZUKI;Jerica Isabel L. REYES;Kozo WATANABE
• 通讯作者: Kozo WATANABE

Urban Climate, Vector Mosquito and Dengue

城市气候、媒介蚊子和登革热

• 发表时间: 2022
• 作者: Faridah Lia;Suroso Djoko Santoso Abi;Fitriyanto Muhammad Suhardjono;Andari Clarisa Dity;Fauzi Isnan;Kurniawan Yonatan;Watanabe Kozo;冨田 侑樹・多伊良 夏樹・小澤 弘宜・酒井健;Jerica Isabel L. Reyes;末吉史佳・Xian Zhang・山内幸正・酒井健;Kozo Watanabe
• 通讯作者: Kozo Watanabe

Eco-epidemiology of Dengue Mosquitoes

登革热蚊子的生态流行病学

• 发表时间: 2022
• 作者: Masanori Kan;Kosei Yamauchi;Ken Sakai;Kozo Watanabe
• 通讯作者: Kozo Watanabe

パジャジャラン大学(インドネシア)

巴乍查兰大学（印度尼西亚）

Implications of using Wolbachia and CRISPR-Cas9 tool for the control of arthropod-borne diseases

使用 Wolbachia 和 CRISPR-Cas9 工具控制节肢动物传播疾病的意义

• 发表时间: 2022
• 作者: Faridah Lia;Suroso Djoko Santoso Abi;Fitriyanto Muhammad Suhardjono;Andari Clarisa Dity;Fauzi Isnan;Kurniawan Yonatan;Watanabe Kozo;冨田 侑樹・多伊良 夏樹・小澤 弘宜・酒井健;Jerica Isabel L. Reyes
• 通讯作者: Jerica Isabel L. Reyes