子宮頚部癌発生におけるヒトパピローウイルスの意義の確立.

确定人乳头病毒在宫颈癌发展中的重要性。

• 批准号: 62015097
• 负责人: 中島 孝
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 1987
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62015097/
• 关键词: 子宮頚部癌; ヒトパピローマウイルス; ハイブリダイゼーション; DNA; mRMA

子宮頚癌新鮮手術材料よりDNAを抽出し, サザンブロット法をもちいて,HPV16ならびに18型の存在を検討した. 17症例のうち, 10例(59%)にHPV DNAが証明され,その内訳はHPV16型が7例,HPV18型が3例であった. 新鮮手術材料の入手不可能な症例では,パラフィンブロックとして保存された組織よりDNAを抽出し,ドットハイブリダイゼーション法を行なった. 子宮頚部浸潤癌69例のうち,29例(42.0%)にHPV16型が認められたが,HPV18型は認められなかった. これらを組織学的にみると,扁平上皮癌;24/55,腺扁平上皮癌;2/6,腺癌;3/7,未分化癌;0/1であった. ドットハイブリダイゼーション法でHPV16型が陽性となった10例をIn situ hybridization法で検討したところ,HPV16型DNAは7例に検出できた. 一方,HPV 16 specific mRNAは3例に検出できた.HeLa細胞中では,HPV18型は主として,1.6kb,3.4kbの2種類のmRNAとして転写されている. これらのmRNAは共に細胞DNA中に組み込まれたHPV18型が,細胞側の転写シグナルを使って転写されたもので,ウイルス由来配列と細胞由来配列が融合したものであった. ウイルス由来配列中には,蛋白質に翻訳され得るOpen Reading Frame(E6*,E6,E7)が認められた. 1.6kb,3.4kbのmRNAに相当するcDNAとE7領域のみを含むものをそれぞれNIH3T3細胞に導入した場合,NIH3T3細胞は軟寒天培地中で増殖するようになった. 一方,E6*,E6をそれぞれ単独でNIH3T3細胞に導入しても,軟寒天培地中での増殖能は得られなかった. HPV16型を含む子宮頚部癌細胞DNAでトランスホームしたNIH3T3細胞では,HPV16型由来のmRNAが数種類の長さで観察されたが,これらをcDNAライブラリーから単離し,そのうち4つのcDNAクローンについて,構造解析を行なったところ,いずれもウイルス由来の配列中にE7 ORFを持っていた.

Uterine cancer fresh surgical material DNA extraction, the detection of HPV16 and HPV 18 HPV DNA was detected in 10 cases (59%) of 17 cases, HPV16 in 7 cases and HPV18 in 3 cases. Fresh surgical materials are impossible to obtain. For example, DNA extraction from preserved tissues can be carried out by using the method of DNA extraction. Among 69 cases of invasive carcinoma of uterus, 29 cases (42.0%) were HPV16 and HPV18 respectively. Histologically, squamous cell carcinoma;24/55, adenosquamous cell carcinoma;2/6, adenocarcinoma;3/7, undifferentiated carcinoma;0/1. HPV 16 DNA was detected In 10 cases by situ hybridization, and in 7 cases by reverse hybridization. HPV 16 specific mRNA was detected in 3 cases. HPV18 type mRNA was detected in HeLa cells. The mRNA of HPV type 18 was assembled in the DNA of the cell, and the cell side DNA was assembled in the DNA of the cell. Open Reading Frame(E6*,E6,E7) is recognized by the protein. The 1.6 kb, 3.4 kb mRNA corresponding to cDNA and E7 domain was introduced into NIH 3T3 cells. NIH 3T3 cells were cultured in soft environment. E6* and E6 were introduced into NIH 3T3 cells alone, and the proliferation ability of NIH 3T3 cells in soft and cold culture was improved. HPV type 16 contains DNA from cervical cancer cells in NIH 3T3 cells. The origin of HPV type 16 mRNA has been investigated for several types of DNA, including cDNA, and the E7 ORF.