Die Genexpression bei dem hypotrichen Ciliaten Stylonychia lemnae

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In Makronuklei hypotricher Ciliaten befinden sich Millionen von Minichromosomen, die in Stylonychia lemnae mit durchschnittlich 2,5 Kb sehr kurz sind und nur ein Gen enthalten. Da die nichttranskribierten Abschnitte dieser Chromosomen meist weniger als 400 bp lang sind und vermutlich die Sequenzdeterminanten für die Initiation und Termination der Transkription sowie für die DNA Replikation tragen, ist Stylonychia lemnae ein ideales Versuchsobjekt für die Untersuchung dieser Prozesse in einem Protisten. Durch die Entwicklung eines effizienten Transfektionssystems haben wir kürzlich die Voraussetzung für eine funktionelle Analyse minichromosomaler Sequenzen geschaffen. Das System basiert auf der gentechnischen Herstellung intern markierter a1 Tubulin-Minichromosomen, die in den Makronukleus von vegetativen S. lemnae-Zellen mikroinjiziert werden. Es ist geplant, mit diesem System die Signale der Expression und der Replikation des a1 Tubulin-Minichromosoms zu ermitteln. Weiterhin wird die Transkriptionsrate anderer makronukleärer Gene bestimmt und ggf. transkriptionsmodulierende Promotorelemente charakterisiert werden. Schließlich soll das System benutzt werden, um das Phänomen der Überamplifizierung einiger makronukleärer Minichromosomen zu analysieren. Diese Untersuchung wird die Bestimmung der dafür relevanten Sequenzabschnitte und die Analyse spezifischer DNA/Protein-Wechselwirkungen umfassen.