魚類筋肉の細胞外マトリックス領域におけるCa^<2+>濃度およびpH環境の死後変化

死后鱼肌肉细胞外基质区Ca^2+浓度和pH环境的变化

• 批准号: 08760204
• 负责人: 安藤 正史
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kinki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760204/
• 关键词: 細胞外マトリックス; カルシウムイオン; 死後変化

本研究ではCa^<2+>濃度測定のため,Ca^<2+>キレート作用をもつ蛍光色素であるfura-2を用いた。まず,Ca^<2+>濃度と蛍光強度比との相関曲線を作成した。Ca^<2+>農を0.1〜1μMに設定した緩衝液をCaCl_2とEGTAの濃度を調節しながら作製し,それぞれの緩衝液に対しfura-2が一定濃度になるように溶解した。次に,個々のCa^<2+>濃度における365および405nmの励起での530nmにおけるそれぞれの蛍光強度を蛍光分光々度計により測定し,その結果から蛍光強度の比とCa^<2+>濃度との相関曲線を作成した。蛍光は時間経過とともに減衰するため,再現性のある蛍光強度の測定は困難であるが,蛍光強度比は時間の経過にかかわらず一定であるため,この方法は再現性の点で非常に有効であった。次に,細胞外マトリックス領域におけるCa^<2+>濃度の測定を行った。試料には著しい軟化を起こすグレの活魚を用いた。延髄刺殺後,厚さ2〜3mmの筋肉のスライスをカミソリの刃により切り出し,スライドグラスにのせたうえで,fura-2溶液で染色した。染色後,余分な染色液を洗浄し,落射型蛍光顕微鏡により,励起幅360-370nm,および400-410nmの励起フィルターを用いて,515-550-nmにおける蛍光像をそれぞれ写真撮影した。次に,現像した写真について,デンシトスキャナーにより細胞外マトリックス領域の反射率を測定することで,便宜的な蛍光強度をもとめ,2種類の波長で励起した場合の蛍光強度比を求めた。上記より得られた相関曲線と,筋肉のスライスから測定された蛍光強度比を用いることにより,細胞外マトリックス領域のCa^<2+>濃度を測定したところ,細胞内は約100nMであるのに対して,細胞外マトリックス領域では検出されなかった。

In this study, Ca^<2+> concentration determination was carried out, and Ca^<2+> concentration determination was carried out. The correlation curve between Ca^<2+> concentration and luminous intensity ratio was constructed. The concentration of CaCl_2 and EGTA in buffer solution was adjusted to 0.1 ~ 1μM Ca <2+> 2, and the concentration of fura-2 in buffer solution was adjusted to a certain concentration. In addition, the Ca^<2+> concentration was measured at 365 nm and 405nm, and the excitation at 530nm was measured at 530nm. The results showed that the Ca^<2+> concentration was related to the Ca^<2+> concentration. The method is very difficult to determine when the light intensity ratio is different from that of the time. Second, extracellular Ca^<2+> concentration was measured. The sample was softened and the fish was used. After the assassination, the thickness of 2 ~ 3mm and the muscle diameter of the skin were cut and dyed with fura-2 solution. After staining, the rest of the staining solution was washed, and the excitation amplitude of the epi-emission microscope was 360-370nm, 400-410nm, and 515 -550-nm. Second, the reflection rate of extracellular space is measured by the method of image processing, and the ratio of light intensity is determined by the method of excitation of two kinds of wavelengths. The above curve indicates that the extracellular Ca^2+ concentration is about 100nM, and the extracellular Ca^2+ concentration is about 20 nM.

项目成果

Masashi Ando: "Influence of bleeding on post-mortem tenderization of fish muscle during chilled storage" Scanning Microscopy. 10巻3号. 895-904 (1996)

Masashi Ando：“冷藏过程中放血对鱼肌肉死后嫩化的影响”扫描显微镜，第 10 卷，第 3 期，895-904（1996 年）