酵母のイノシトールリン脂質を介した分泌タンパク質輸送機構の解明

通过酵母肌醇磷脂阐明分泌蛋白转运机制

• 批准号: 08760090
• 负责人: 竹川 薫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760090/
• 关键词: PI3-キナーゼ; PI4-キナーゼ; 分裂酵母; 糖タンパク質; CPY; 液胞

動物細胞において、ホスファチジルイノシトール(PI)による代謝開店の増進が見られる。最近の研究でPIの代謝回転はシグナル伝達経路のみならず、タンパク質の分泌経路にも非常に重要な役割を果たしていることが明らかになりつつある。そこで本研究では現在、注目を集めている脂質キナーゼファミリーの酵母における機能の解析を行う目的で分裂酵母Schizosaccharomyces pombeのPI-キナーゼのクローニング、さらにS.pombeの分泌糖タンパク質輸送に関与する糖鎖生合成経路について解析を行った。(1)分裂酵母PI4-キナーゼホモログ遺伝子をゲノムライブラリーからPCR法を用いて単離しpik4+遺伝子と命名した。アミノ酸配列の決定を行ったところ、2ケ所のイントロンを含む1,925アミノ酸から成り、出芽酵母のPI4-キナーゼであるStt4タンパク質と32%の相同性を示した。また遺伝子破壊実験の結果、pik4+遺伝子は生育に必須であることがわかった。Pik4タンパク質に特異的な抗体を作製し、細胞内タンパク質の分画を行ったところ、本タンパク質は膜画分に局在することがわかった。(2)分裂酵母の分泌タンパク質の解析のためのマーカーと成りうる液胞カルボキシペプチダーゼY(CPY)とインベルターゼのクローニングを行った。また分裂酵母CPYの液胞への輸送シグナルはプロペプチド中に存在することを明らかにした。(3)分裂酵母の分泌タンパク質の糖鎖付加機構を解析する目的でガラクトース残基の付加されないgms1変異株を取得した。gms1変異を相補する遺伝子を単離したところ、昨年明らかにされたヒトUDP-ガラクトース輸送体と非常に高いホモロジーを示した。gms1+遺伝子破壊株では種々の薬剤に対する感受性が増加して、実際にUDP-ガラクトースのゴルジへの取り込み活性が極度に減少していることを明らかにした。

Animal cells にお にお て, ホスファチジ て ノシト ノシト, ノシト and が (PI)による metabolic opening <s:1> increase が see られる. の recent study で PI の metabolic back planning は シ グ ナ ル 伝 da 経 road の み な ら ず, タ ン パ ク qualitative の secretion 経 road に も very important な に "を cut fruit た し て い る こ と が Ming ら か に な り つ つ あ る. そ こ で this study で は now, attention を め て い る lipid キ ナ ー ゼ フ ァ ミ リ ー の yeast に お け る function analytical を の line split で yeast Schizosaccharomyces う purpose Pombe の PI - キ ナ ー ゼ の ク ロ ー ニ ン グ, さ ら に supachai panitchpakdi ombe の secretion sugar タ ン パ ク mass transport に masato and す る sugar lock biosynthesis 経 road に つ い analytical line を っ て た. (1) split yeast PI4 - キ ナ ー ゼ ホ モ ロ グ posthumous son 伝 を ゲ ノ ム ラ イ ブ ラ リ ー か ら を PCR method with い て 単 from し pik4 + heritage 伝 と son named し た. ア ミ ノ acid with column line の decided を っ た と こ ろ, 2 ケ の イ ン ト ロ ン を contains む 1925 ア ミ ノ acid か ら into り, budding yeast の PI4 - キ ナ ー ゼ で あ る Stt4 タ ン パ ク qualitative と 32% の identity を shown し た. The results of the 壊 experiment show that the 伝 offspring of pik4+ have に fertility に must である である とがわ った った った った った った った. Pik4 タ ン パ ク qualitative に し the specific antibody を な cropping, intracellular タ ン パ ク qualitative の points line drawing を っ た と こ ろ, this タ ン パ ク qualitative は membrane draw points に bureau in す る こ と が わ か っ た. (2) split yeast の secretion タ ン パ ク qualitative analytical の の た め の マ ー カ ー と into り う る vacuole カ ル ボ キ シ ペ プ チ ダ ー ゼ Y (CPY) と イ ン ベ ル タ ー ゼ の ク ロ ー ニ ン グ を line っ た. ま た split yeast CPY の vacuole へ の conveying シ グ ナ ル は プ ロ ペ プ チ ド に exist す る こ と を Ming ら か に し た. (3) split yeast の secretion タ ン パ ク qualitative analytical す の sugar plus lock agencies を る purpose で ガ ラ ク ト ー ス residues の plus さ れ な い gms1 - different strains を obtain し た. Gms1 - different fill を phase す る heritage 伝 son を 単 from し た と こ ろ, yesterday in Ming ら か に さ れ た ヒ ト UDP - ガ ラ ク ト ー ス conveying body と very high に い ホ モ ロ ジ ー を shown し た. Gms1 + heritage 伝 son broken 壊 strains で は kind 々 の 薬 tonic に す seaborne る susceptibility が raised plus し て, be interstate に UDP - ガ ラ ク ト ー ス の ゴ ル ジ へ の take り 込 み が extremely active に reduce し て い る こ と を Ming ら か に し た.

项目成果

Kaoru Takegawa: "The Schizosaccharomyces pombe gms1+ gene encodes an UDP-galactose transporter homologue required for protein galactosylation." Biochem.Biophys.Res.Commun.(in press). (1997)

Kaoru Takekawa：“粟酒裂殖酵母 gms1 基因编码蛋白质半乳糖基化所需的 UDP-半乳糖转运蛋白同源物。”