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均一糖鎖含有バイオ医薬品をワンステップで合成する技術による最適糖鎖構造の探索

利用技术寻找最佳聚糖结构，一步合成均质含聚糖生物药物

基本信息

批准号：
21K19090
负责人：
竹川薫
金额：
$ 4.08万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

治療用抗体として利用されているIgGタンパクのFc領域にはN-結合型糖鎖が存在しており、その糖鎖に付加するフコース残基の除去がエフェクター機能を増加させることが知られている。そこで本研究では均一な糖鎖構造を有する糖タンパク質を酵素合成するために、糖タンパク質糖鎖の脱フコシル化に必要な1,6-α-L- フコシダーゼとエンドグリコシダーゼ(ENGase)を担体に固定化して、効率的に脱フコシル化を行う技術について検討を行った。本研究ではビフィズス菌由来のフコシダーゼと、フコース含有糖鎖を切断可能なENGaseである冬虫夏草由来Endo-CoMを用いた。両酵素をそれぞれNHS-Activated Agarose とCyanogen bromide-activated Sepharoseに固定化を行った。条件を検討したところ、両酵素ともNHS-Activated Agaroseに固定化後も活性を保持することが確認することができた。特にNHS-Activated Agaroseに固定化したフコシダーゼでは42%の活性を保持していた。さらに、両固定化酵素を用いてN-結合型糖鎖の脱フコシル化後のIgGについてLC/MSで測定を行ったところ、脱フコシル化された糖鎖が確認できた。ヒト由来の糖タンパク質には、3本鎖や4本鎖の多分岐の糖鎖を持つものも報告されている。そのような糖鎖の脱糖鎖と糖転移を可能にするために新たなエンドグリコシダーゼの検索を試みた。その結果、腸内細菌の一種であるBacteroides nordiiのゲノムに存在するエンドグリコシダーゼが多分岐糖鎖を切断する新規な特異性を有する酵素であることを明らかにできた。今後はこれらの酵素も固定化を試みて、糖タンパク質糖鎖部分のすげ替えに有効なシステムの検討を行いたい。

The presence of an N-binding glycolatch in the Fc domain of an IgG antibody for therapeutic use and the removal of residues from the N-binding glycolatch in the Fc domain of an IgG antibody for therapeutic use increase the function of the antibody. In this study, the structure of uniform sugar chain is necessary for enzyme synthesis of sugar chain, and the technology of 1,6-α-L-glucose chain removal is discussed. In this study, the origin of Cordyceps sinensis was determined by the use of Endo-CoM. NHS-Activated Agarose and Cyanogen bromide-activated Sepharose are immobilized enzymes. The condition of NHS-Activated Agarose immobilization is confirmed. NHS-Activated Agarose Immobilization 42% In addition, the immobilized enzyme was used to determine the IgG content after the N-binding glycan was removed from the enzyme by LC/MS The origin of the sugar chain is determined by the quality of the sugar chain, and the quality of the sugar chain. The sugar lock and the sugar lock can be changed. As a result, one species of intestinal bacteria, Bacteroides nordii, exists in the gut and has a new specificity in the enzyme. In the future, we will try to immobilize the enzyme and replace it with sugar.