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ウシ卵母細胞の分離と成長・成熟誘導法に関する研究

牛卵母细胞分离及诱导生长成熟方法的研究

基本信息

批准号：
08876051
负责人：
花田章
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

表面を細切し成熟培養可能なCOCを採取した後のウシ卵巣をミンチにした。この卵巣片10gを200mLの0.5mM EDTAを含むカルシウム、マグネシウム欠のハンクス液中で30℃で15分間マグネチックスターラーでゆっくりと攪拌、洗浄した後、コラゲナーゼによる卵胞回収に用いた。コラゲナーゼは200単位/mLになるようにハンクス液に溶解し、pHを7.4に調節した物を用いた。洗浄後の卵巣片を100mLのコラゲナーゼ液に懸濁し、30℃で3時間マグネチックスターラーでゆっくりと攪拌した。1時間毎に1mmのメッシュを用いて、卵巣片を回収し、ロ液をハンクス液で遠心洗浄、後実体顕微鏡下で卵胞を回収した。直径50-100μmの卵胞腔形成以前の卵胞を選別し、95%空気、5%CO_2の湿潤気相下で十日間培養を行った。培養はMaCoy's 5A培地に0.04μg/mLヒドロコルチゾン、6mg/mLグルコースとITSを添加したものを用い、2mg/mL濃度のコラーゲンゲル包埋培養法と30μLのドロップ中での静置培養法で行った。コラーゲンゲル包埋培養法では卵胞は発育せず、培養終了後に正常な卵母細胞も回収できなかったが、静置培養法では平均76%の卵胞で細胞分裂が確認され、7.8%(16/204)の卵胞で培養後正常な卵母細胞が回収できたが、培養開始時と、培養終了時の卵母細胞の直径には有意な差は認められなかった。今回の実験に用いた段階の卵母細胞の発育を示す適当なマーカーが知られていないため、卵母細胞の直径増加以外に発育を推測する方法は存在しない。今後はより長期間安定して培養可能な系を確立すると、卵母細胞の発育に関連するマーカーの発見が重要である。

The surface is finely cut and the mature culture is possible. The COC is taken after the egg is collected.このOVIN tablets 10g, 200mL, 0.5mM EDTA containing むカルシウム, マグネシウムのハンクス liquid, 30℃, 15 minutes, マグネチAfter the ックスターラーでゆっくりと is stirred and washed, the コラゲナーゼによる egg cells are recovered and used.コラゲナーゼは200 units/mL になるようにハンクス Liquid is dissolved and pH is adjusted to 7.4. It is suitable for use. After washing, the ovum pieces were suspended in 100 mL of liquid and stirred at 30°C for 3 hours. 1. For each 1mm sterile tissue, clean it with a sterilizer, collect the egg pellets, and wash the ovary with a liquid sterile liquid, and then collect the ovules under a microscope. Before the egg cavity with a diameter of 50-100 μm is formed, the cells are selected and cultured for ten days in a humidified atmosphere of 95% air and 5% CO_2. Cultivate MaCoy's 5A Pedi 0.04μg/mL ヒドロコルチゾン, 6mg/mL グルコースとITSをadded したものをUse the 2mg/mL concentration of のコラーゲンゲル embedded culture method and the 30μL のドロップ中でのstatic culture method. The コラーゲンゲルembedded culture method can be used to incubate oocytes and normal oocytes after the culture is completed.できなかったが and static culture method では average 76% of egg cells and confirmation of cell division され, 7.8% (16/204) of the normal oocyte recovery after culture, the diameter of the oocyte at the beginning of culture, and the diameter of the oocyte at the end of culture are all the same. This time, the use of oocytes in different stages will be used to show the appropriate level of care. It is speculated that there is a method other than the increase in the diameter of the oocyte. In the future, it is important to establish the possibility of long-term stable culture of the system and the connection between oocyte breeding and breeding.