肺保存における抗オキシダント酵素の遺伝子発現に関する研究

肺保存过程中抗氧化酶基因表达的研究

• 批准号: 08877207
• 负责人: 松居 喜郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08877207/
• 关键词: lung preservation; gene expression; ischemia reperfusion injury; antioxidant enzyme; SOD; catalase; lschemia reperfusion injury

肺移植の需要は増加しているが,長時間保存の困難さもありその成績は満足できるものではない。本研究ではこれまで行われてきた肺保存研究に分子生物学的手法を導入し,肺保存時の肺組織中antioxidant enzymeのgene expressionについて検討するのが主な目的である.実験動物としてSpraugue-Dawley雄ラットを用い、ペントバルビタール麻酔下に気管切開を行って人工呼吸管理とした.ついで胸骨縦切開により肺を露出し、低カリウムリン酸緩衝液(Potassium buffered saline(PBS);K=20mM)で摘出時初回灌流を行った.灌流後標準UW液にて冷保存(4℃)を行うが,保存時間により実験群を以下の4群に分け,組織を-80℃凍結保存した.1)12時間保存群(n=5),2)18時間保存群(n=5),3)24時間保存群(n=5),4)保存なし(対照群)(n=5).以前の温阻血保存肺を用いた予備実験では,Chomczy nski and Saachi法にてRNAの組織よりの抽出,Northern blot hybridization analysisを行った結果,保存時間とmRNA発現について明らかな相関が認められたが,本研究における冷保存時間と,antioxidant enzymeであるSOD,カタラーゼ,およびグルタチオン還元酵素のmRNA発現については,明らかな相関は認められなかった.保存時間と保存後肺機能との関連については,別の機序を考える必要があると思われる.現在,保存時間とアポトーシス発現との関連をTUNEL法およびDNA histogramで解析する研究を進行させている.

The need for lung transplantation is increasing, and long-term preservation is difficult. In this study, we introduced molecular biological methods into lung preservation research, and discussed the gene expression of antioxidant enzyme in lung tissue during lung preservation. The animal was treated with Spraugue-Dawley, and the artificial respiration was performed. The lungs were exposed during sternotomy, and the initial reperfusion was performed in Potassium buffered saline(PBS)(K=20mM). After perfusion, the standard UW solution was stored in cold (4℃) for 4 groups, and the tissues were frozen at-80℃ for 12 time groups (n=5), 2)18 time groups (n = 5), 3)24 time groups (n =5), and 4) control groups (n=5). In this study, the time of cold preservation was determined by the correlation between the expression of antioxidant enzyme SOD, antioxidant enzyme SOD and antioxidant enzyme mRNA. Preservation time and lung function after preservation are related, and other mechanisms are necessary. Now, the study on the relationship between preservation time and DNA histogram discovery is underway.