静脈バイパスの内膜肥厚における接着分子発現の解明と遺伝子導入に関する研究

静脉旁路内膜增厚中粘附分子表达和基因转移的阐明研究

基本信息

批准号：
08877221
负责人：
宮本享
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】脳神経外科領域における頭蓋外血行再建(バイパス)術にみられる再狭窄、閉塞においては血管平滑筋細胞の増殖が病変の主体をなしている。酸化LDLの主要構成脂質であるリゾフォスファチジルコリン(lyso-PC)は血管内皮細胞においてPDGF-A鎖の分泌を亢進させ、病変の発生進展に関与していると考えられている。我々はlyso-PCにおけるPDGF-A鎖の転写制御機構につき検討した。【方法・結果】培養ウシ大動脈内皮細胞を10%FCS添加DMEMにて培養し、lyso-PCにて刺激した。ノザンブロット及びウエスタンブロットにて転写因子であるEgr-1の発現が誘導されることを示した。以前よりPDGF-A鎖のpromotor領域にEgr-1が結合する認識配列があることが知られており、その認識配列の合成オリゴヌクレオチドを用いたgel shiftassayを行い、lyso-PCの刺激により合成オリゴヌクレオチドへ結合するタンパクが増加することを示し、このbandが非標識オリゴヌクレオチドを加えることにより消失することを確認している。【今後の検討課題】今後は抗Egr-1抗体を用いたsupershift assayと大腸菌に発現させた組換えEgr-1タンパクを用いたassayにより、PDGF-A鎖のpromotor領域に結合するのがEgr-1そのものであるかどうかを検討する予定である。また、Egr-1によって転写が誘導されるtissue factorなどのさまざまな遺伝子の再狭窄における役割も検討していく予定である。

[目的]在神经外科领域的颅外血运重建（旁路）手术中，血管平滑肌细胞的扩散是病变的主要原因。氧化LDL的主要成分脂质溶血磷脂酰胆碱（Lyso-PC）增强了血管内皮细胞中PDGF-A链的分泌，并被认为参与病变的发育和发育。我们研究了Lyso-PC中PDGF-A链的转录控制机理。 [方法和结果]在具有10％FC的DMEM中培养培养的牛主动脉内皮细胞，并用lyso-PC刺激。北部和蛋白质印迹表明，转录因子EGR-1的表达被诱导。一段时间以来，人们已经知道有一个识别顺序，其中eGR-1与pDGF-A链的启动子区域结合，使用识别顺序的合成寡核苷酸进行凝胶偏移测量，表明蛋白质与合成寡核苷酸的结合会导致溶出的溶液和不消失的蛋白质结合，并添加了该蛋白质。 [未来的考虑]将来，我们将通过使用抗IGR-1抗体进行超级速度测定法调查EGR-1本身是否使用抗-ERG-1抗体结合了PDGF-A链的启动子区域，并使用在Escherichia Coli中表达的重组EGR-1蛋白进行测定。我们还将考虑各种基因在再狭窄（例如组织因子）中的作用，例如，在其中诱导转录。