Development of novel assay system based on nuclear receptor function

基于核受体功能的新型检测系统的开发

• 批准号: 09460044
• 负责人: KATO Shigeaki
• 金额: $ 8.32万
• 依托单位: Institute of Molecular and Cellular Biosciences, The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09460044/
• 关键词: nuclear receptor; steroid hormone; vitamin D; coactivator; transcription; two-hybrid system; TGF-beta; screening; 標的組換え動物; ノックアウトマウス; ビタミンA.D; 分子メカニズム; 標的遺伝子群; レセプター欠損マウス; Diffential Display; ビタミン欠乏動物; 標的組換えマウス; リン酸化; transient expressio

Steroid hormones exert their actons through cognate nuclear receptors, which act ligand-inducible transcriptional factors. For this ligand-induced transactivation, ligand-bound nuclear receptors, nuclear receptors depend on ligand binding, but it Is induced only by agonist, but not antgonist. In the present study, we searched novel coactivators for nuclear receptors for estrogen, androgen mineralcorticoid, vitamin D by biochemical approaches and yeast two-hybrid systen, and found several candidate cDNAs. Especially, we found that Smad3, TGF-beta signal inducers, acts as coactivator for VDR.Moreover, we developed an assay system based on the interactions of coactivators with nuclear receptors in yeast to evaluate agonistic/antagonistid activity of related compounds.

类固醇激素通过同源核受体发挥作用，这些受体作用于配体诱导的转录因子。对于这种配体诱导的反式激活，配体结合核受体，核受体依赖于配体结合，但它只被激动剂诱导，而不是拮抗剂。本研究利用生物化学方法和酵母双杂交系统寻找雌激素、雄激素、盐皮质激素、维生素D核受体的新辅激活因子，并筛选出几个候选cDNA。特别是，我们发现TGF-β信号诱导剂Smad 3是VDR的共激活剂，并建立了一个基于共激活剂与酵母核受体相互作用的检测系统，以评价相关化合物的激动/拮抗活性。

项目成果

Kitanaka,S.,Kato,S.,et al.: "Inactivating mutations in the human 25-hydroxyvitamin D_3 1α-hydroxylase gene in patients with pseudovitamin D-deficient rickets" N. Engl.J.Med.338. 653-661 (1998)

Kitanaka, S.、Kato, S. 等人：“假性维生素 D 缺乏性佝偻病患者中人 25-羟基维生素 D_3 1α-羟化酶基因的失活突变”N. Engl.J.Med.338。 (1998)

Takeda, S., Kato, S., et al.: "Stimulation of osteoclast formation by 1,25-dihydroxyvitamin D requires its binding to vitamin D receprot (VDR) in osteoblastic cells : Studies using VDR knockout mice" Endocrinology. (in press). (1999)

Takeda, S.、Kato, S. 等人：“1,25-二羟基维生素 D 刺激破骨细胞形成需要其与成骨细胞中的维生素 D 受体 (VDR) 结合：使用 VDR 敲除小鼠的研究”内分泌学。

加藤茂明: "分子生物学3巻 高等動物の分子生物学 : 核内レセプタースーパーファミリー" 朝倉書店, 438 (1998)

加藤茂明：《分子生物学第3卷：高等动物的分子生物学：核受体超家族》朝仓书店，438（1998）

Kitanaka,S., Kato,S., et al.: "A new compound heterozygous mutation in the 11β-hydroxysteroid dehydrogenase type 2 gene in a case of apparent mineralocorticoid excess." J.Clin.Endocrinol.Metab.82. 4054-4058 (1997)

Kitanaka,S.、Kato,S. 等人：“在盐皮质激素明显过量的情况下，11β-羟基类固醇脱氢酶 2 型基因出现新的复合杂合突变。”J.Clin.Endocrinol.Metab.82-。 4058 (1997)

Yamauchi,J., Kato,S., et al.: "Two forms of avian (chicken) TATA-binding protein mRNA generated by alternative polyadenylation." Biochem.Biophys.Res.Commun.234. 406-411 (1997)

Yamauchi,J.、Kato,S. 等人：“通过选择性多聚腺苷酸化生成两种形式的禽类（鸡）TATA 结合蛋白 mRNA。”