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摂食行動と時間記憶:室傍核組織培養系を用いた記憶形成と保持機構の解析

饮食行为和时间记忆：使用室旁核组织培养系统分析记忆形成和保留机制

基本信息

批准号：
09877015
负责人：
本間研一
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

1. NPYmRNAの定量的PCR法による計測強い摂食惹起物質であり、時間記憶に関係すると考えられているニューロペプチドY(NPY)のmRNAを定量的に測定する方法を開発し、脳の特定部位におけるNPY合成の指標とした。すなわち、パルコビッツ法で採取した微量脳組織からRNAを抽出し、RT-PCR法にてNPYcDNAを得た。これをPCR法にて増幅するが、その際標識物質として蛍光色素を組み込んだ相補的なDNAプローベ(タックマン・プローベ)を用意し、PRC産物を発生する蛍光強度によって定量化した。2. 弓状核及び孤束核におけるNPYmRNAと時間記憶室傍核に分布するNPYニューロンは弓状核および孤束核由来である。そこで、周期的制限給餌により時間記憶が形成されている状態で、両神経核におけるNPYmRNAの経時的測定を定量的PCR法を用いておこなった。その結果、孤束核では時間記憶を表す給餌前活動に一致してNPYmRNAの増加が認められ、NPY合成が促進されていることが示唆されたが、弓状核では給餌直前あるいは給餌直後にNPYmRNAの増加がみられ、孤束核とは時間的に異なる発現パターンを示した。3. in situ hybridizationによるNPYmRNAの定量的測定と時間記憶時間記憶が形成されている状態での、NPYmRNAの脳内分布と時間的変動をin situ hybridization法を用いて検討した。その結果、NPYmRNAは、弓状核、室傍核、大脳皮質、海馬などに強く発現したが、孤束核での発現は弱かった。弓状核でNPYmRNA発現は、給餌直前と直後に強く発現し、定量的PCRと同じ結果を示した。一方、孤束核でのNPYmRNA発現は対照群と差はなかった。

1. A PCR method for quantitative determination of NPY mRNA was developed to measure the relationship between the concentration of NPY mRNA and time memory. RNA was extracted from micro-tissues by RT-PCR and NPY cDNA was obtained by PCR. The PCR method is used to quantify the intensity of light generated by the PCR product. 2. NPY mRNA in the arcuate nucleus and nucleus tractus solitarius The PCR method for quantitative determination of NPYmRNA was used in the determination of NPYmRNA in the state of formation of time memory and in the control of cycle. The results showed that NPY mRNA increased consistently before feeding, NPY synthesis was promoted, and NPY mRNA increased consistently after feeding. 3. Quantitative determination of NPYmRNA in situ hybridization and temporal memory formation, NPYmRNA distribution and temporal movement in situ hybridization NPYmRNA, arcuate nucleus, paraventricular nucleus, large cortex, hippocampus, nucleus fascicularis solitarius, nucleus fascicularis solitarius NPY mRNA expression in arcuate nucleus was detected by PCR. NPYmRNA expression in a single nucleus is opposite to that in a single nucleus.