部位特異的化学修飾による膜蛋白質高次構造の決定
通过位点特异性化学修饰测定膜蛋白高级结构
基本信息
- 批准号:09878153
- 负责人:
- 金额:$ 1.15万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Exploratory Research
- 财政年份:1997
- 资助国家:日本
- 起止时间:1997 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
本研究では、テトラサイクリン排出蛋白Tet(B)を素材として、蛋白工学的手法により立体構造の推定を行った。まず、Cys-free変異体をもとに、任意の位置の残基をCysに置換した変異体を多数構築し、膜透過性のSH試薬NEMと、膜不透過性のAMSを用いて、生菌体で両者ともに結合するものは菌体表層(ペリプラズム側)、NEMのみ結合するものは菌体の内側という基準で、膜を12回貫通する蛋白であることを、初めて活性のある膜蛋白を用いて実験的に決定することに成功した。この方法は異物排出蛋白のみならず、膜貫通蛋白の構造決定に広く応用できる普遍的な方法である。ついで、連続的にCys置換した一連のCys走査変異体を用いて、疎水的な領域ではNEMとの反応生が悪く、親水的な領域では良いという原理に基づいて、膜貫通領域の範囲を精密に決定した。さらに、これまで立体構造が決定された膜タンパク質の、膜貫通セグメントの配置に法則性のあることを見いだし、その法則に基づいてTetA(B)の膜貫通セグメントを配置し、量子力学的エネルギー計算によって構造を最適化するという手法により、膜輸送蛋白としては初めて、立体構造モデルを構築することに成功した。
In this study, protein Tet (B) was extracted from protein by protein engineering methods. Cys-free mutants, residues at arbitrary positions, Cys substitutions, mutants construction, membrane permeability, NEM, membrane impermeability, AMS use, bacterial surface layer, NEM binding, bacterial inner layer, reference, membrane 12-loop penetration, protein construction, membrane permeability, AMS use, bacterial inner layer, NEM binding, bacterial inner layer, reference, membrane 12-loop penetration, protein construction, membrane permeability, membrane impermeability, membrane permeability, membrane impermeability, membrane impermeability The initial activity of the membrane protein is determined by the activity of the membrane protein. This method is a common method for determining the structure of foreign matter excretion protein and membrane penetration protein. The continuous replacement of Cys and the continuous investigation of Cys can be used in different ways, the watery na field can be transformed into NEM, the hydrophilic na field can be transformed into NEM, and the hydrophilic na field can be transformed into the basic principle of the good na field, and the scope of the membrane penetration field can be precisely determined. In this paper, three dimensional structure is determined by the film quality, film penetration and arrangement of the material, the principle of the material, the principle of the material, the calculation of the quantum mechanics, the optimization of the structure, the film transport protein, the construction of the three dimensional structure.
项目成果
期刊论文数量(6)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kimura,T.et al.: "Cysteine-Scanning Mutagenesis around Transmembrane Segment III of Tn10-Encoded Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter." J.Biol.Chem.273. 1-5 (1998)
Kimura,T.et al.:“Tn10 编码的金属四环素/H^ 反转运蛋白跨膜片段 III 周围的半胱氨酸扫描诱变。”
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- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Fujihira,E.et al.: "Roles of Acidic Residues in the Hydrophilic Loop Regions of Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter of Staphylococcus aureus." FEBS Lett.419. 211-214 (1997)
Fujihira,E.et al.:“金属四环素/H^金黄色葡萄球菌逆向转运蛋白亲水环区域中酸性残基的作用”。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Hirata,T.et al.: "A Novel Compound,1,1-Dimethyl-5-(1-hydroxypropyl)-4,6,7-trimethylindan,is an Effective Inhibitor of the tet(K)Gene-Encoded Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter of Staphylococcus aureus." FEBS Lett.412. 337-340 (1997)
Hirata,T.et al.:“一种新型化合物,1,1-二甲基-5-(1-羟丙基)-4,6,7-三甲基茚满,是 tet(K) 基因编码金属的有效抑制剂
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kimura,T.et al.: "Roles of Conserved Arginine Residues in the Metal-Tetracycline/H^+ Antiporter of Escherichia coli." Biochemistry. 37(in press). (1998)
Kimura,T.et al.:“保守精氨酸残基在大肠杆菌金属四环素/H^ 逆向转运蛋白中的作用”。
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
Kimura,T.et al.: "Remote Conformational Effects of the Gly62→Leu Mutation of the Tn10-Encoded Metal-Tetarcycline/H^+ Antiporter of Escherichia coli and Its Second-Site Suppressor Mutation." Biochemistry. 36. 6941-6946 (1997)
Kimura, T. 等人:“大肠杆菌 Tn10 编码的金属四环素/H^+ 逆向转运蛋白的远程构象效应及其第二位点抑制子生物化学”。 (1997)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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