精子活性化の細胞内メカニズムの解明への直接的なアプローチ

阐明精子激活的细胞内机制的直接方法

• 批准号: 09878171
• 负责人: 宮崎 俊一
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878171/
• 关键词: 精子; カルシウム; 先体反応; 受精

前年度に引き続き、主としてハムスター精子に対し先体反応誘発物質として卵透明帯を可溶化したものを投与した際の細胞内Ca反応について、Ca上昇と先体胞開口分泌の時間的関係および電位依存性L型Caチャネルの関与について解析を進めた。またサイクリックヌクレオチド(cAMP、cGMP)の効果についても検討した。[Ca上昇と先体胞開口分泌の時間的関係]可溶化卵透明帝の投与に対し、精子細胞内Ca濃度は頭部内赤道部付近から上昇が始まり約0.6秒以内に先体胞を除く頭部全体に伝播した後、2分以上にわたり高いレベルに保たれた。その間に、先体胞の蛍光強度が急激に減少する現象が観察された。これは開口分泌により先体胞内部の蛍光色素が細胞外に流出したためと考えられる。Ca上昇の開始から先体胞開口分泌開始までの平均時間は22秒であった。[電位依存性L型Caチャネルの関与の検討]L型Caチャネル阻害剤の存在下では、透明帯によるCa反応の増加相のパターンや速度、およびピークの大きさは影響されなかったが、Ca上昇の持続時間が有意に短くなった。また、先体胞開口分泌も阻害されたことから、L型QCaチャネルによって細胞内Caが長時間高濃度に維持されることが開口分泌に必要であることが示唆された。[サイクリックヌクレオチドの効果]予備的な実験において、細胞膜透過性のサイクリックヌクレオチドのアナログ、8-br-cGMPや8-br-cAMPの投与により精子内Ca上昇が観察された例があったが、ケイジドcGMP(膜透過性)をロードした精子のどの部分に紫外線照射しても、Ca上昇は誘発されなかった。サイクリックヌクレオチドと精子内Caの関係については、さらに検討が必要である。

In the past year, the relationship between the concentration of Ca and the time of precursor cell opening secretion and the potential-dependent L-type Ca complex production and the analysis of the protein was studied. The effect of cAMP and cGMP on the function of the drug was investigated. [Ca Relationship between increase and time of opening and secretion of precursor cells] When the solubilized egg is transparent, the Ca concentration in the sperm cell begins to increase from near the inner equator of the head within about 0.6 seconds. After the precursor cells are removed, the entire head is covered and more than 2 points are covered. The phenomenon that the fluorescence intensity of the precursor cell decreases rapidly during excitation has been observed. The secretion of light from the interior of the precursor cell is accompanied by extracellular efflux. The average time for Ca to rise and begin to secrete from precursor cells is 22 seconds. [Potential dependent L-type Ca ~(2 +) generation and investigation] L-type Ca ~(2 +) generation inhibitor in the presence of transparent band, Ca ~(2 +) reverse phase increase in the speed, reverse phase, reverse phase influence, Ca ~(2 +) rise duration intentionally short. L-type QCa secretion is necessary for maintaining high intracellular Ca concentration for a long time. [Results] The prepared conditions include: cell membrane permeability, 8-br-cGMP and 8-br-cAMP administration, Ca increase in sperm, etc. Examples include: cell membrane permeability, cGMP(membrane permeability), ultraviolet irradiation, Ca increase in sperm, etc. The relationship between Ca and sperm is necessary.

项目成果

Miyazaki, S & Shirakawa, H: "Spatiotemporal Analysis of Calcium Dynamics in Hamster Spermatozoa during Acrosowe Reaction Observed with Confocal Microscopy" 33rd International Congress of Physiological Sciences. (Abstract). (1997)

宫崎，S

Mohri,T.,Miyazaki,S. Shirakawa,H.,& Ikegami,S.: "Sperm-induced local[Ca^<2+>];rise separated from the Ca^<2+> wave in sea urchin eggs in the presence of gawete fusion inhibitor,jaspisin" Development. 125. 293-300 (1998)

毛里，T.，宫崎，S.

Nakano.Y, et al: "Spatiotemporal Dynamics of Intracellular Calcium in the Mouse Egg Injected with a Spermatozoon" Molecular Human Reproduction. 3. 1087-1093 (1997)

Nakano.Y 等人：“注射精子的小鼠卵细胞内钙的时空动态”人类分子生殖。

Shirakawa,H.& Miyazaki,S: "Spatiotemporal characterization of intracellular Ca^<2+> rise during the acrosowe reaction of mammalane spermatozoa induced by zona pellucida" Developmental Biology. (in press). (1999)

白川，H.

Shirakawa.H, et al.: "Spatiotemporal Analysis of Intracellular Calcium Increoses in Hamster Sperm Induced by Soluhilized Zona Pellucida." Japanese Journal of Physiology. 47・Suppl 2. S62 (1997)

Shirakawa.H 等人：“溶解透明带诱导的仓鼠精子细胞内钙增加的时空分析”，《日本生理学杂志》47·增刊 2.S62 (1997)。