クマムシ固有の新規クロマチンタンパク質S261が寄与する放射線耐性機構の解析
缓步动物特异性新型染色质蛋白S261的放射抗性机制分析
基本信息
- 批准号:13J01805
- 负责人:
- 金额:$ 2.11万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2013
- 资助国家:日本
- 起止时间:2013-04-01 至 2016-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1. 一部領域を欠失したDsupを定常発現するヒト培養細胞株の作出DNA保護活性を担う領域を探索する目的で、C末端側を欠失したS261(以下、Damage suppressor, Dsup)を定常発現する株(DsupΔC)、およびC末端側のみを発現する株(DsupC)の作出を試みた。その過程において、DsupCでは全ての細胞株が致死性を示した。一方、DsupΔCでは致死性はみられず、親株と同程度の細胞増殖能を示すことがわかった。得られたDsupΔCに対して抗Dsup抗体を用いた細胞内局在解析を行った結果、DsupΔCは細胞質に局在することが確認されたため、DsupΔCを定常的に発現する株の作出に成功したと判断した。2. DsupΔCにおけるDNA保護活性/X線照射後の細胞生存性への影響の検証DsupおよびDsupΔCが放射線照射によるDNA single-strand breaks(SSBs)の発生を抑制するかを検証した。Dsup_HEK293および、DsupΔCに対してX線を照射した後、Alkaline Comet assayを行った。その結果、Dsup_HEK293では親株と比較して有意にSSBsを含むDNA損傷の発生が抑制された。一方、DsupΔCではこのDNA保護活性は消失し、SSBsの発生抑制はみられなかった。また、X線照射後にDNA損傷マーカーであるγ-H2AXに対する免疫染色を行い、細胞当たりのFoci数を定量した結果、Dsup_HEK293では親株であるHEK293と比較してFoci数が有意に減少したが、DsupΔCでは、Foci数の減少傾向がみられるものの再現性を伴った有意な減少は認められなかった。さらに、4GyのX線照射し、細胞増殖能への影響を検証したところ、DsupΔCではDsup_HEK293よりも生細胞数が顕著に減少した。C末端側領域を欠失したことによりX線からのDNA保護活性が十分に機能せず、細胞増殖能に影響を与えた可能性が考えられる。以上の結果から、哺乳類培養細胞においてX線照射によるDNA損傷から保護活性を示すにはC末端側領域が重要であることが分かった。
1. The aim of this study was to explore the domain of DNA protection activity in cultured cell lines, the C-terminal side of S261(hereinafter, Damage suppressor, Dsup), the C-terminal side of S261(hereinafter, Damage suppressor, Dsup), and the C-terminal side of S261 (hereinafter, Dsup). The cell lines are lethal in the process of death. A party, DsupΔC, or lethality, or parental strain, or cell proliferation, is indicated. Dsup delta C is used to determine whether a plant has been successfully identified in the cytoplasmic analysis. 2. DsupΔC inhibits the development of DNA single-strand breaks (SSBs) after radiation exposure. Dsup_HEK293, DsupΔC, Alkaline Comet assay Dsup_HEK293 was found to inhibit the development of DNA damage caused by SSBs. The DNA protective activity of SSBs was inhibited by DsupΔC. DNA damage after X-ray irradiation was detected by γ-H2AX immunostaining. Foci number was quantified by Dsup HEK293. Foci number was intentionally decreased by comparison. Foci number was decreased by DsupΔC. The effect of X-ray irradiation of 4 Gy on cell proliferation was observed. The DsupΔC and Dsup_HEK293 decreased significantly. C-terminal domain is deficient in X-ray DNA protection activity, function, cell proliferation ability, and possibility. The above results show that the C-terminal region is important for DNA damage and protective activity in mammalian cultured cells under X-ray irradiation.
项目成果
期刊论文数量(17)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
A novel chromatin protein of radiation-resistant animal protects DNA and cells from radiation damages.
抗辐射动物的一种新型染色质蛋白可保护 DNA 和细胞免受辐射损伤。
- DOI:
- 发表时间:2015
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:T. Hashimoto;Y. Saito;M. Oyama;H. Kozuka-Hata;A. Enomoto;K. Miyagawa;H. Kuwahara;D. D. Horikawa;T. Katayama;K. Arakawa;A. Toyoda;A. Fujiyama;T. Kubo;T. Kunieda.
- 通讯作者:T. Kunieda.
乾燥耐性動物クマムシで大量発現する新規膜タンパク質A8の解析.
分析在耐干燥动物缓步动物中大量表达的新型膜蛋白 A8。
- DOI:
- 发表时间:2014
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:島津拓真;橋本拓磨;阿部耕太;田中冴;片山俊明;荒川和晴;豊田敦;久保健雄;國枝武和.
- 通讯作者:國枝武和.
放射線耐性を示すクマムシの新規タンパク質S261によるDNA損傷の抑制.
新型抗辐射缓步动物蛋白 S261 抑制 DNA 损伤。
- DOI:
- 发表时间:2014
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:橋本拓磨;斎藤裕樹;尾山大明;秦裕子;榎本敦;宮川清;桑原宏和;堀川大樹;豊田敦;片山俊明;荒川和晴;藤山秋佐夫;久保健雄;國枝武和.
- 通讯作者:國枝武和.
放射線耐性を示すクマムシの新規タンパク質によるDNA損傷の抑制.
新型抗辐射缓步动物蛋白抑制 DNA 损伤。
- DOI:
- 发表时间:2014
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:橋本拓磨;斎藤裕樹;尾山大明;秦裕子;榎本敦;宮川清;桑原宏和;堀川大樹;豊田敦;片山俊明;荒川和晴;藤山秋佐夫;久保健雄;國枝武和.
- 通讯作者:國枝武和.
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橋本 拓磨其他文献
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- DOI:
- 发表时间:
2018 - 期刊:
- 影响因子:0
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- DOI:
- 发表时间:
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- 影响因子:0
- 作者:
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- DOI:
- 发表时间:
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- 作者:
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- 发表时间:
2018 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
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アゾベンゼン高分子液晶中にドープされた蛍光色素の協同的光配向挙動と蛍光スイッチング
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- 发表时间:
2016 - 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
橋本 拓磨;深港 豪;金 善南;緒方 智成;栗原 清二 - 通讯作者:
栗原 清二
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