トランスポザーゼＲＮＡの翻訳制御による導入遺伝子を含まないｉＰＳ・分化細胞の作製

通过转座酶 RNA 的翻译控制生产不含导入基因的 iPS/分化细胞

• 批准号: 13J02408
• 负责人: 中西 秀之
• 金额: $ 2.53万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J02408/
• 关键词: iPS細胞; microRNA; イメージング; 分化; 遺伝子組込み; トランスポゾン; 分化誘導; 再生医療; 遺伝子導入; 遺伝子発現制御

心筋細胞において高発現しているmiRNAであるhsa-miR-1-3pならびにhsa-miR-208a-3pに応答してレポーター遺伝子の発現が変化するトランスポゾンベクターを開発した。これらのベクターを組み込んだiPS細胞を心筋へと分化誘導したところ、レポーター遺伝子の発現レベルに基づき、心筋細胞とそうでない細胞をフローサイトメトリーにより選別することができた。また、未分化細胞で高発現しているmiRNAであるhsa-miR-302a-5pに応答してレポーター遺伝子発現が変化するトランスポゾンベクターと蛍光顕微鏡を用いることで、細胞を剥がすことなく、その分化状態を継続的に可視化できた。加えて、ゲノムに組込まれるトランスポゾンベクターとは異なり、ゲノムに組込まれずに細胞内で保持されるためゲノムに変異を引き起こす可能性が低いエピゾーマルベクターを改良し、その保持率を上昇させた。

High heart muscle cells に お い て 発 now し て い る micrornas で あ る hsa - miR - 1-3 p な ら び に hsa - miR - 208 - a - 3 p に 応 answer し て レ ポ ー タ ー heritage 伝 son の 発 が now - the す る ト ラ ン ス ポ ゾ ン ベ ク タ ー を open 発 し た. こ れ ら の ベ ク タ ー を group み 込 ん だ iPS cells を heart muscle へ と induction し た と こ ろ, レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 の 発 now レ ベ ル に base づ き, heart muscle cells と そ う で な い cells を フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー に よ り choose don't す る こ と が で き た. High ま た, undifferentiated cells で 発 now し て い る micrornas で あ る hsa - miR - 302 - a - 5 p に 応 answer し て レ ポ ー タ ー heritage 伝 son 発 が now - the す る ト ラ ン ス ポ ゾ ン ベ ク タ ー と 蛍 light 顕 micromirror を with い る こ と で, cell を peel が す こ と な く, そ の differentiation state を 継 続 に visualization で き た. Add え て, ゲ ノ ム に group 込 ま れ る ト ラ ン ス ポ ゾ ン ベ ク タ ー と は different な り, ゲ ノ ム に group 込 ま れ ず に intracellular で keep さ れ る た め ゲ ノ ム に - different を lead き up こ す が unlikely い エ ピ ゾ ー マ ル ベ ク タ ー を improved し, そ の retention を rise さ せ た.

项目成果

哺乳類細胞における人工遺伝子ネットワークの構築

哺乳动物细胞人工基因网络的构建

• 发表时间: 2015
• 期刊: 生物工学会誌
• 作者: 中西秀之;齊藤博英
• 通讯作者: 齊藤博英

新規レポーターベクターによるmicroRNA活性の継続的検出はiPS細胞の分化モニタリングを可能にする

使用新型报告载体连续检测 microRNA 活性，实现 iPS 细胞分化监测

• 发表时间: 2015
• 作者: 中西秀之;三木健嗣;吉田善紀;齊藤博英
• 通讯作者: 齊藤博英

Novel microRNA reporter vectors to distinguish microRNA activity from transcriptional repression

新型 microRNA 报告载体可区分 microRNA 活性和转录抑制

• 发表时间: 2015
• 作者: 中西秀之;三木健嗣;吉田善紀;齊藤博英;Tadashi TANABE;Hideyuki Nakanishi and Hirohide Saito
• 通讯作者: Hideyuki Nakanishi and Hirohide Saito