エピゲノムを制御する転写装置付随タンパク質群の同定と解析

与控制表观基因组的转录装置相关的蛋白质的鉴定和分析

• 批准号: 13J07740
• 负责人: 岡崎 宏亮
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Shimane University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2013
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2013-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J07740/
• 关键词: 熱ショックタンパク質; ヘテロクロマチン; RNAi; 低分子RNA; 分裂酵母; Spt6

これまでに分裂酵母を用い、 Hsp90 と Hsp40 ファミリータンパク質である Mas5 がセントロメアヘテロクロマチンの構築に重要であることを示した。一方でテロメアヘテロクロマチンの構築には必要とされないことから、２つの熱ショックタンパク質は RNAi 経路を介したヘテロクロマチン構築に貢献すると考えられる。本年度は、熱ショックタンパク質と RNAi 経路を介したヘテロクロマチン構築の分子機構のさらなる理解を目的として研究を行い、以下の知見を得た。前年度、我々は Hsp90 変異体細胞よりセントロメア RNA に由来するスメア状の低分子 RNA（20-50nt）を検出し、これが RNAi とは独立した RNA 分解経路による分解中間産物である可能性を報告した。これを踏まえて本年度は、RNA の分解に関わるタンパク質群の変異体セットを用いてノーザンブロット解析を行い、該当する RNA 分解経路の同定を試みた。その結果、いくつかの因子においてHsp90 変異体細胞とよく似たスメア状の低分子 RNA を検出した。これらのことから、これらの酵素が関与する RNA 分解経路は Hsp90 のシャペロニング機能を必要とすると考えられる。これまでの研究は RNAi 経路における Hsp90 と Mas5 の重要性を示していたが、RNAi 経路のエフェクター因子である Ago1（Argonauteの分裂酵母ホモログ）が siRNA を保持できるかどうかは未検討であったので、調査した。その結果、２つの熱ショックタンパク質の変異体細胞において Ago1 はセントロメア由来の siRNA を保持していないことがわかった。この結果は、Hsp90 変異体細胞で蓄積するセントロメ由来のスメア状の低分子 RNA は機能的な siRNA ではないことを示し、２つの熱ショックタンパク質変異体では RNAi 経路が破綻することを示している。

This is the key to the structure of the system. One side of the problem is the construction of the problem, and the other is the construction of the problem. This year, we conducted research on the molecular mechanism of RNAi pathway, and obtained the following findings In the past year, we have reported the possibility of detecting RNA (20-50nt) in Hsp90 allogeneic cells and RNA degradation intermediates in RNA degradation pathways. This year, we will try to determine the identity of RNA decomposition pathway. As a result, Hsp90 and Hsp90 were found in different cells. The RNA degradation pathway is necessary for Hsp90 to function as an enzyme. This study shows the importance of RNAi pathway Hsp90 and Mas5, RNAi pathway factors such as Ago1 (Argonaute split yeast), siRNA maintenance, and investigation. As a result, Ago1 maintains the origin of siRNA in the host cell. The results showed that Hsp90 allogeneic cells accumulated a variety of genes, and that there was a gap in the RNAi pathway.

项目成果

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Spt6 prevents transcription-coupled loss of posttranslationally modified histone H3.

• DOI: 10.1038/srep02186
• 发表时间: 2013
• 期刊: SCIENTIFIC REPORTS
• 影响因子: 4.6
• 作者: Kato, Hiroaki;Okazaki, Kosuke;Iida, Tetsushi;Nakayama, Jun-ichi;Murakami, Yota;Urano, Takeshi
• 通讯作者: Urano, Takeshi