Role of nitrated proteins in the development of food allergies

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今年度は、実験動物を用いてニトロ化タンパク質の皮膚への塗布が免疫グロブリンE（IgE）を誘導し得るかを確認した。実験には６匹の３週齢のBALB/cマウス（雄）を用いた。これらをニトロ化タンパク質塗布群（３匹）と対照群（３匹）とに分けた。実験にはカゼインタンパク質を用い、タンパク質のニトロ化はペルオキシ亜硝酸処理により行った。対照群にはペルオキシ亜硝酸処理を行わないカゼインを用いた。タンパク質の塗布は、マウスの背側の体毛を鉗子でできるかぎり除き、その後除毛クリームを用いることで完全に除去した。ニトロ化または非ニトロ化タンパク質溶液はFinn Chamberを利用して保持した。まず、付属の濾紙小片にタンパク質溶液をしみ込ませ、それをマウスの除毛部に置き、Finn Chamberの金属部で保持した。これを外側の粘着テープで固定した。この状態で３日間維持し、その後４日間のインターバルをおいた。この３日間の維持と４日間のインターバルを１セットとして、連続して３セット（３週間）実施した。なお、どちらの群も飲料水・餌については常に自由に摂取できる状態で飼育した。飼育の明暗サイクルは１２時間とし、２５℃の環境で１０週齢まで７週間飼育した。実験終了後は麻酔下で採血した。採取した血液から血漿を調製し、ELISA（Enzyme Linked Immuo-Sorbent Assay）によりIgE濃度を調べた。測定の結果、IgEの値に有意な差はみられなかった。この原因として、マウスが固定したFinn Chamberを剥がし、タンパク質溶液が十分に皮膚に留まらなかったためと考えられた。次年度以降は、固定方法に留意して再度確認を行う予定である。