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細胞の成長制御を司るmTOR経路のカルシウムシグナルによる新規調節機構の解明

阐明控制细胞生长的 mTOR 途径钙信号的新型调节机制

基本信息

批准号：
22KJ1595
负责人：
雨宮優奈
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ1595/
关键词：
mTORC1 Calcium Calmodulin TSC2

项目摘要

報告者らは、これまでに動物細胞へのアミノ酸投与が細胞内Ca2+濃度の上昇を引き起こし、mTORC1活性を正に制御することを見出してきている。さらに、Ca2+シグナルをmTORC1経路へと伝達する因子として、Ca2+結合タンパク質であるcalmodulin（CaM）を見出し、mTORC1経路の強い負の制御因子であるTSC2（tuberous sclerosis complex 2）とCaMがCa2+依存的に結合すること、またその結合領域を報告してきた。そこで、CaMがTSC2を介してmTORC1の活性を制御するその詳しい分子機構の解明を通じ、mTORC1の異常活性を伴う種々の病態発症の分子基盤の解明や、治療法の開発に貢献することを目指している。報告者らはこれまでにTSC2のCaM結合領域が、mTORC1活性化因子Rhebとの結合に重要であると報告のある領域と重なることを同定している。そのため、令和4年度はCaMがTSC2-Rheb間の結合へ与える影響を明確に評価する方法を探索し、検証した。TSC2-Rheb間の結合に関して、通常広く用いられている免疫沈降法等では、結合を捉えることができなかったため、深海エビ由来発光酵素ルシフェラーゼの小断片（HiBiT）と大断片（LgBiT）の再会合を利用することで、簡便かつ定量的に結合を評価する方法を用いたところTSC2-Rheb間の結合を捉えることに成功した。また、大腸菌を用いて野生型CaM及びCa2+結合能欠失CaM変異体を添加し、TSC2-Rheb間の結合に変化があるか検証したところ、TSC2-Rheb間の結合は野生型CaMの添加により有意に低下し、Ca2+結合能欠失CaM変異体の添加では変化しなかった。このことから、CaMはTSC2-Rheb間の結合を変化させることでmTORC1活性を制御していると考えられる。

The reporter found that the increase of intracellular Ca2 + concentration and the positive control of mTORC1 activity were induced by acid administration in animal cells. In addition, Ca2 +-dependent binding factors and Ca2 +-dependent binding domains of mTORC1 are reported. Details of molecular mechanisms involved in the regulation of mTORC1 activity by CaM and TSC2, molecular mechanisms involved in the regulation of mTORC1 abnormal activity, molecular mechanisms involved in pathological diseases, and contributions to the development of therapeutic methods. Reporter: TSC2 CaM binding domain, mTORC1 activation factor Rheb binding domain In 2004, the combination of TSC2 and Rheb was explored and verified. The binding between TSC2 and Rheb is usually used in the middle of the immune sedimentation method. The binding between TSC2 and Rheb is successfully captured in the middle of the immune sedimentation method. The binding energy of wild-type CaM and Ca2 + was decreased by adding CaM variant, TSC2-Rheb binding was decreased by adding CaM variant, TSC2-Rheb binding was decreased by adding CaM variant. CaM and TSC2-Rheb binding are controlled by mTORC1 activity.