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RANKL刺激で出現する核内構造体におけるRNA制御を介した骨代謝制御機構の解明

阐明 RANKL 刺激后出现的核结构中 RNA 调节介导的骨代谢控制机制

基本信息

批准号：
22KJ2800
负责人：
荒崎恭弘
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Cpeb4はCPE配列を含むmRNAに結合する因子であり，転写後調節を介して，がん系統分化や赤血球終末分化を制御する。以前，私は，Cpeb4が破骨細胞分化を促進する因子であることを報告したが，Cpeb4の詳細な分化メカニズムや標的遺伝子は不明であった。そこで，Cpeb4抑制時に遺伝子発現が減少した，破骨細胞マスター転写因子であるNfatc1に着目し，Cpeb4による転写後調節を検討した。shRNAによりCpeb4を抑制したRAW264.7株を用いて，RNA-seq解析およびqPCRを行った結果，未分化状態にも関わらず，破骨細胞分化遺伝子が有意に減少した。またRANKL刺激によるRANKL下流シグナル（p-Akt, p-IkB, p-JNK, p-p38）の活性が減少した。さらに，細胞増殖が促進していることが明らかになった。Nfatc1 mRNAおよびタンパク質量は，Cpeb4抑制により減少した。次に，Cpeb4がNfatc1の転写後調節を制御するかを検討した。転写阻害剤DRB処理後に残存するNfatc1 mRNA量をqPCRで検討したところ，Cpeb4抑制により安定性が減少した。しかしながら，Nfatc1の3’UTRをクローニングし，luciferase assayを行った結果，有意な差は見られなかった。そこで，Nfatc1の転写に着目し，Nfatc1の2種類のプロモーターP1およびP2の活性を検討するために，luciferase assayを行った。その結果，Cpeb4抑制により，P1活性が減少した。また，Cpeb4抑制によってP1領域におけるH3K4me3化の減少，H3K27me3化の増加が見られ，Nftac1転写が強力に抑制された。以上から，Cpeb4はNfatc1 mRNAの安定性を増加し，また転写を間接的に促進することで破骨細胞分化を促進することが示唆された。

Cpeb4 は CPE with column を containing む mRNA に combining する factor であり, planning to write after adjusting を interface して, がん system differentiation や red blood cell terminal differentiation を suppression する. は ago, private, Cpeb4 が osteoclast differentiation を promote する factor であることを report したが, Cpeb4 の detailed な differentiation メカニズムや mark heritage 伝 son は unknown であった. そこで, Cpeb4 inhibition に heritage 伝 son 発が now reduce した, osteoclast マスター planning write factor である Nfatc1 に mesh し, Cpeb4 による planning to write after adjusting を beg し検た. ShRNA により Cpeb4 を inhibit した RAW264.7 を strains with いて, RNA - seq parsing および qPCR を line った results, undifferentiated state にも masato わらず, osteoclast differentiation but 伝が intentionally に reduce した. また RANKL stimulation による RANKL obscene シグナル (p - Akt, p - IkB, p - JNK, p - p38 lightning) の activity が reduces した. Youdaoplaceholder0, cell proliferation が promotes <s:1> てるるとがとが and ららになった. The mass of Nfatc1 mRNA is およびタ, パ and パ, and the inhibition of Cpeb4 is によ and た. Then に, Cpeb4がNfatc1 転転 write to regulate を control するを検を検 discuss た. Planning to write resistance against tonic DRB 処に remaining after Richard する Nfatc1 amount of mRNA を qPCR で beg し検たところ, Cpeb4 inhibit により stability が reduce した. しかしながら, Nfatc1 の 3 'UTR をクローニングし, luciferase assay を line った results, intentionally な poor は see られなかった. そこで, Nfatc1 の planning write に mesh し, Nfatc1 の 2 kinds のプロモーター P1 および P2 の active を beg す検るために, luciferase assay を line った. As a result, Cpeb4 inhibited によによ and P1 activity が decreased たた. また, Cpeb4 inhibit によって P1 field における H3K4me3 の reduce, H3K27me3 change の raised plus が see られ, Nftac1 planning write が powerful に inhibit された. Above から, Cpeb4 は Nfatc1 mRNA の stability を raised し, また planning write を indirect に promote することで osteoclast differentiation を promote することが in stopping された.