RANKL刺激で出現する核内構造体におけるRNA制御を介した骨代謝制御機構の解明

阐明 RANKL 刺激后出现的核结构中 RNA 调节介导的骨代谢控制机制

基本信息

  • 批准号:
    22KJ2800
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.41万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2023
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2023-03-08 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Cpeb4はCPE配列を含むmRNAに結合する因子であり,転写後調節を介して,がん系統分化や赤血球終末分化を制御する。以前,私は,Cpeb4が破骨細胞分化を促進する因子であることを報告したが,Cpeb4の詳細な分化メカニズムや標的遺伝子は不明であった。そこで,Cpeb4抑制時に遺伝子発現が減少した,破骨細胞マスター転写因子であるNfatc1に着目し,Cpeb4による転写後調節を検討した。shRNAによりCpeb4を抑制したRAW264.7株を用いて,RNA-seq解析およびqPCRを行った結果,未分化状態にも関わらず,破骨細胞分化遺伝子が有意に減少した。またRANKL刺激によるRANKL下流シグナル(p-Akt, p-IkB, p-JNK, p-p38)の活性が減少した。さらに,細胞増殖が促進していることが明らかになった。Nfatc1 mRNAおよびタンパク質量は,Cpeb4抑制により減少した。次に,Cpeb4がNfatc1の転写後調節を制御するかを検討した。転写阻害剤DRB処理後に残存するNfatc1 mRNA量をqPCRで検討したところ,Cpeb4抑制により安定性が減少した。しかしながら,Nfatc1の3’UTRをクローニングし,luciferase assayを行った結果,有意な差は見られなかった。そこで,Nfatc1の転写に着目し,Nfatc1の2種類のプロモーターP1およびP2の活性を検討するために,luciferase assayを行った。その結果,Cpeb4抑制により,P1活性が減少した。また,Cpeb4抑制によってP1領域におけるH3K4me3化の減少,H3K27me3化の増加が見られ,Nftac1転写が強力に抑制された。以上から,Cpeb4はNfatc1 mRNAの安定性を増加し,また転写を間接的に促進することで破骨細胞分化を促進することが示唆された。
Cpeb4 は CPE with column を containing む mRNA に combining す る factor で あ り, planning to write after adjusting を interface し て, が ん system differentiation や red blood cell terminal differentiation を suppression す る. は ago, private, Cpeb4 が osteoclast differentiation を promote す る factor で あ る こ と を report し た が, Cpeb4 の detailed な differentiation メ カ ニ ズ ム や mark heritage 伝 son は unknown で あ っ た. そ こ で, Cpeb4 inhibition に heritage 伝 son 発 が now reduce し た, osteoclast マ ス タ ー planning write factor で あ る Nfatc1 に mesh し, Cpeb4 に よ る planning to write after adjusting を beg し 検 た. ShRNA に よ り Cpeb4 を inhibit し た RAW264.7 を strains with い て, RNA - seq parsing お よ び qPCR を line っ た results, undifferentiated state に も masato わ ら ず, osteoclast differentiation but 伝 が intentionally に reduce し た. ま た RANKL stimulation に よ る RANKL obscene シ グ ナ ル (p - Akt, p - IkB, p - JNK, p - p38 lightning) の activity が reduces し た. Youdaoplaceholder0, cell proliferation が promotes <s:1> て る る とが とが and ら らに なった. The mass of Nfatc1 mRNA is およびタ, パ and パ, and the inhibition of Cpeb4 is によ and た. Then に, Cpeb4がNfatc1 転 転 write to regulate を control する を検 を検 discuss た. Planning to write resistance against tonic DRB 処 に remaining after Richard す る Nfatc1 amount of mRNA を qPCR で beg し 検 た と こ ろ, Cpeb4 inhibit に よ り stability が reduce し た. し か し な が ら, Nfatc1 の 3 'UTR を ク ロ ー ニ ン グ し, luciferase assay を line っ た results, intentionally な poor は see ら れ な か っ た. そ こ で, Nfatc1 の planning write に mesh し, Nfatc1 の 2 kinds の プ ロ モ ー タ ー P1 お よ び P2 の active を beg す 検 る た め に, luciferase assay を line っ た. As a result, Cpeb4 inhibited によ によ and P1 activity が decreased た た. ま た, Cpeb4 inhibit に よ っ て P1 field に お け る H3K4me3 の reduce, H3K27me3 change の raised plus が see ら れ, Nftac1 planning write が powerful に inhibit さ れ た. Above か ら, Cpeb4 は Nfatc1 mRNA の stability を raised し, ま た planning write を indirect に promote す る こ と で osteoclast differentiation を promote す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

期刊论文数量(11)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
東京理科大学薬学部分子薬理学研究室
东京理科大学药学院分子药理学实验室
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
RNA-binding protein Cpeb4 promotes osteoclast differentiation by stabilizing Nfatc1 mRNA.
RNA 结合蛋白 Cpeb4 通过稳定 Nfatc1 mRNA 促进破骨细胞分化。
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Arasaki Y;Li M;Hayata T
  • 通讯作者:
    Hayata T
破骨細胞分化過程におけるRNA 結合タンパク質Cpeb4 核内局在機構の解明
阐明破骨细胞分化过程中RNA结合蛋白Cpeb4的核定位机制
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Sugimoto T;Imai S;Yoshikawa M;Fujisato T;Hashimoto T;Nakamura T;荒崎 恭弘,李 政道,江面 陽一 ,早田 匡芳
  • 通讯作者:
    荒崎 恭弘,李 政道,江面 陽一 ,早田 匡芳
RNA-binding protein Cpeb4 is an essential factor for osteoclast differentiation localized in nuclear bodies in a RANKL-dependent manner
RNA结合蛋白Cpeb4是破骨细胞分化的重要因子,以RANKL依赖性方式定位于核体
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Arasaki Y;Li M;Ezura Y;Hayata T
  • 通讯作者:
    Hayata T
Precision Medicine
  • DOI:
    10.1007/978-1-0716-0904-0
  • 发表时间:
    2019-05
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Yingping Cao;Xianjin Zhu
  • 通讯作者:
    Yingping Cao;Xianjin Zhu
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荒崎 恭弘其他文献

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