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RANKL刺激で出現する核内構造体におけるRNA制御を介した骨代謝制御機構の解明

阐明 RANKL 刺激后出现的核结构中 RNA 调节介导的骨代谢控制机制

基本信息

批准号：
22KJ2800
负责人：
荒崎恭弘
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

Cpeb4はCPE配列を含むmRNAに結合する因子であり，転写後調節を介して，がん系統分化や赤血球終末分化を制御する。以前，私は，Cpeb4が破骨細胞分化を促進する因子であることを報告したが，Cpeb4の詳細な分化メカニズムや標的遺伝子は不明であった。そこで，Cpeb4抑制時に遺伝子発現が減少した，破骨細胞マスター転写因子であるNfatc1に着目し，Cpeb4による転写後調節を検討した。shRNAによりCpeb4を抑制したRAW264.7株を用いて，RNA-seq解析およびqPCRを行った結果，未分化状態にも関わらず，破骨細胞分化遺伝子が有意に減少した。またRANKL刺激によるRANKL下流シグナル（p-Akt, p-IkB, p-JNK, p-p38）の活性が減少した。さらに，細胞増殖が促進していることが明らかになった。Nfatc1 mRNAおよびタンパク質量は，Cpeb4抑制により減少した。次に，Cpeb4がNfatc1の転写後調節を制御するかを検討した。転写阻害剤DRB処理後に残存するNfatc1 mRNA量をqPCRで検討したところ，Cpeb4抑制により安定性が減少した。しかしながら，Nfatc1の3’UTRをクローニングし，luciferase assayを行った結果，有意な差は見られなかった。そこで，Nfatc1の転写に着目し，Nfatc1の2種類のプロモーターP1およびP2の活性を検討するために，luciferase assayを行った。その結果，Cpeb4抑制により，P1活性が減少した。また，Cpeb4抑制によってP1領域におけるH3K4me3化の減少，H3K27me3化の増加が見られ，Nftac1転写が強力に抑制された。以上から，Cpeb4はNfatc1 mRNAの安定性を増加し，また転写を間接的に促進することで破骨細胞分化を促進することが示唆された。

Cpeb4 CPE is equipped with a combination of mRNA and factor markers, which is used to control the differentiation of red blood cells and the differentiation of red blood cells. In the past, private medicine, Cpeb4 broken bone cell differentiation promoting factor, Cpeb4 cell differentiation, differentiation, When Cpeb4 is suppressed, there is no change in the number of cells, and the writing factor of the broken cell is focused on the Nfatc1. After the Cpeb4 is written, the data is read. The RAW264.7 strain was inhibited by shRNA Cpeb4, and the results were analyzed by RNA-seq. The results showed that the undifferentiated cells were not differentiated, and the cellular differentiation of osteoclasts was intentionally rare. The activity of RANKL stimulation (p-Akt, p-IkB, p-JNK, p-p38) is less than that of RANKL. In order to promote the growth of cells, there is no need to know what to do. Nfatc1 mRNA is sensitive to the volume, while Cpeb4 suppresses the volume to the minimum. For the second time, after Cpeb4 Nfatc1 write, please make sure that you make sure that you don't have any trouble. After writing and blocking the DRB, it remains that the Nfatc1 mRNA is measured, the qPCR is measured, and the stability is reduced by Cpeb4. This is not true. Nfatc1 3 'UTRY has a significant impact on the results. The results of the luciferase assay tests are intended to affect the performance. For example, Nfatc1 writes the target, Nfatc1 2, P1, P2, activity, luciferase assay, etc. The results showed that Cpeb4 inhibited the activity of P1 and decreased the activity of P1. In this case, the Cpeb4 suppression is limited in the P1 field, the H3K4me3 is less, the H3K27me3 is added, and the Nftac1 is written to suppress the stress. For the above reasons, Cpeb4 Nfatc1 mRNA stability is increased, and the following words are written to promote the differentiation of osteoclast cells.