発癌プロモーターにより誘導されるヒト培養細胞の分泌蛋白の研究

致癌启动子诱导的培养人类细胞中分泌蛋白的研究

• 批准号: 60015051
• 负责人: 内田 驍
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60015051/
• 关键词: 発癌プロモーター; 分泌たんぱく質; c-myc遺伝子

従来発癌プロモーターを培養細胞に作用させる実験は数多く報告されているがヒト培養細胞を用いたものは少い。この研究では発癌プロモーターのヒト培養細胞の分泌たんぱく質に対する効果を調べ、発癌プロモーターの作用を知ることを目的とする。ヒト肝癌培養細胞株であるHuH-6,Cl-5細胞にTPAを作用させると、3時間以内に分子量約4万6千(p46)のたんぱく質が細胞外へ分泌されてくる。このp46の分泌量はTPAの濃度に依存している。TPAと同様な活性を持っと言われているteleocidinやapliciatuxinでも同じように誘導する。しかし発癌プロモーター活性をもたないフォルボールエステル誘導体ではp46を決して誘導しない。アクチノマイシンD存在下でTPAを作用させてもp46は誘導されないことから、このたんぱく質の誘導はTPAによって転写レベルでの調節をうけているものと考えられる。なおp46は崩壊産物でなく、糖たんぱく質であるが燐の附加はみられなかった。p46は肝癌培養細胞の分泌蛋白であることから、生体内では血清中に存在していると考えられ、2種類の抗ヒト血清抗体と反応させたが、いずれの場合も沈降しないことから、未知の蛋白である可能性が強い。別の培養肝癌細胞であるHu-H-7Cl-4に対してもTPAを作用させると細胞密度が少いときに顕著な差がみられ、極めてわずかであったp46の分泌が増加するとともに分子量約5万7千の蛋白も著明に誘導した。ラウスLTRにc-myc遺伝子を結合したプラスミッドを、Hu-H-7Cl-4に導入したところ、p46の分泌をTPAの場合よりも強く誘導した。これがp46であることは2次元電気泳動による解析から確認された。myc遺伝子の導入によりp46の培地中への定常的な分泌がみられるようになったことからp46を得やすくなり精製への可能性が強くなった。そこでp46の精製を試み、現在SDS電気泳動でほぼ単一なバンドとして得られる条件を知ることが出来た。

The number of reports on the effects of cell culture on cancer development is increasing. The aim of this study is to understand the role of tumor growth regulators in the secretion of tumor cells in culture. The molecular weight of TPA was about 46,000 (p46) and the extracellular secretion of TPA was observed in HuH-6,Cl-5 cells within 3 days. The amount of p46 secreted depends on the concentration of TPA. TPA isoforms are expressed in teleocidin and aplicitin and induced in the same way. The expression of p46 is determined by the expression of p46. In the presence of TPA, p46 is induced by TPA, and TPA is regulated by TPA.なおp46は崩壊产物でなく、糖たんぱく质であるが磷の附加はみられなかった。p46 protein secreted by cultured liver cancer cells is highly likely to be present in serum in vivo, and 2 types of anti-tumor serum antibodies are likely to be present in some cases. In addition, the cell density of cultured hepatoma cells was increased by increasing the secretion of p46, and the molecular weight of protein was increased by increasing the production of p46. The expression of c-myc protein in LTR was strongly induced by TPA, Hu-H-7Cl-4 and p46. The analysis of the two-dimensional electrokinetic energy is confirmed. The possibility of myc gene introduction into p46 and steady secretion in culture is strong. The p46 is refined, and the SDS electrokinetic parameters are determined.

项目成果

Exp,CELL,RES.152. (1985)

实验，细胞，RES.152。

J,Bicl.CHEM.261. (1986)PRC.NATL,ACAD.SCI.USA.

J，Bicl.CHEM.261。

Cancer Res.45. (1985)

癌症研究 45。

J,Bicl.CHEM.261. (1986)

J，Bicl.CHEM.261。