核構成々分のモノクローナル抗体の分離とその細胞内注入による細胞複製機構の解析

通过细胞内注射从核成分中分离单克隆抗体并分析细胞复制机制

• 批准号: 62615518
• 负责人: 内田 驍
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62615518/
• 关键词: 細胞核; モノクローナル抗体; 染色体周囲; 核孔; 核たんぱくの核輸送

真核細胞の複製機構のうち細胞分裂時における核膜の形成と崩壊に関与する蛋白質および複数をはじめとする種々な核機能に関与している核内の蛋白質の核への輸送機構を知るために核構成々分のモノクローナル抗体を分離した. まずこれ等の抗体を用いて関節蛍光抗体法で細胞を染色し, その性状を核の染色パターンから分離した. 核を均一に染色するもの3つ. 他のすべては核膜をより強く染色した. そのうち凝縮染色体の周囲を染めるものが2つあった. 細胞分裂時の細胞とS, G_1, G_2の各期の細胞と融合させ, 未熟染色体凝縮(PCC)を行わせたところ, G_1およびS期の染色体周囲は染色せずG_2期染色体の周囲を染色した. この事からこの抗体の抗原はG_2期にすでに染色体周囲に集積しはじめている事が解った. さらにこのうちの1つと細胞質のベジクルを染色した. この抗体の抗原の分子量は約40Kであった. これ等の抗体を細胞の細胞質や核へ注入し細胞分裂時にどの様な影響を与え, 染色体の凝縮やマイクロフィラメントとのかかわりを解析していきたい. これ等のものと全く異る抗体として, 核の表面を班点状に染色する抗体も得ることが出来た. 免疫電顕像からこの抗体の認識部位は核孔であると考えられる. この抗体をアフィニティー精製して細胞質へ注入したところ, テストした3種の核蛋白質のすべてについて核への移行が完全に阻害された. その阻害は3時間持続し次第に減少した. 他方核蛋白質の核への移行が完全に阻害されている時, RNAの核からの遊出は殆んど阻害されていなかった. この抗体を用いて細胞分裂時の細胞を染色したところ, ラミンAやCと同様に染色体以外の部位が染色されていた. この抗体の抗原たんぱく質をウエスタンブロッテング法でみたところ分子量62Kと55Kにみられた. 今後これ等のたんぱく質の精製を進め, 核孔形成へのアッセンブリの機構やこのたんぱく質遺伝子のクローニングへと進めていきたい.

Eukaryotic replication machinery during cell division, nuclear membrane formation, breakdown, protein production, protein production, nuclear function, nuclear protein delivery machinery, nuclear composition, separation, antibody production, protein production, protein These antibodies were used to stain cells and isolate nuclear DNA. Nuclear uniform staining. He is a strong member of the nuclear membrane.そのうち凝缩染色体の周囲を染めるものが2つあった. During cell division, cells in S, G_1 and G_2 phases were fused and immature chromosome condensation (PCC) was observed. Chromosome cycle staining in G_1 and S phases was observed. Chromosome cycle staining in G_2 phase was observed. The antigen of this antibody is G_2 phase, chromosome cycle accumulation, and the problem is solved. 1. Cytoplasmic staining. The molecular weight of the antibody is about 40K. These antibodies are injected into the cytoplasm and nucleus of cells, and the effects of chromosome condensation on cell division are analyzed. The antibody was detected by spot staining on the surface of the nucleus. The immune response is similar to that of the antibody. The antibody was purified and injected into the cytoplasm, and the migration of three nuclear proteins was completely blocked. The resistance is 3 times longer than the resistance. When the migration of other nuclear proteins is completely blocked, the migration of RNA is completely blocked. This antibody is used to stain cells during cell division and to stain parts other than chromosomes. The antibody has a molecular weight of 62K and 55K. In the future, the quality of the product will be refined, and the pore formation mechanism will be improved.

项目成果

Imamoto-S,N.,Yoneda,Y.,Iwamoto,R.,Sugawa,H.and Uchida,T.: Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.

Imamoto-S,N.、Yoneda,Y.、Iwamoto,R.、Sukawa,H. 和 Uchida,T.：Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.

Kaneda,Y.,Hayes,H.,Uchida,T.,Yoshida,M.C.,and Okada,Y.: Chromosoma. 95. 8-12 (1987)

Kaneda,Y.、Hayes,H.、Uchida,T.、Yoshida,M.C. 和 Okada,Y.：染色体。

Yoneda,Y.,Arioka,T.,Imamoto-Sonobe,N.,Shimonishi,Y.,and Uchida,T.: Exp.Cell Res.170. 439-452 (1987)

米田，Y.，有冈，T.，今本园部，N.，下西，Y.，和内田，T.：Exp.Cell Res.170。

Yoneda,Y.,Imamoto-Sonobe,N.,Yamaizumi,M.and Uchida,T.: Exp.Cell Res.173. 586-595 (1987)

米田，Y.，今本园部，N.，山泉，M.和内田，T.：Exp.Cell Res.173。

Wataya-Kaneda,M.,Kaneda,Y.,Sakurai,T.,Sugawa,H. and Uchida,T.: J. Cell Biology.104. 1-7 (1987)

渡谷金田，M.，金田，Y.，樱井，T.，菅川，H.