糖タンパク質のミクロ不均一性と糖鎖プロセシングの調節

糖蛋白微观异质性和聚糖加工的调控

• 批准号: 60214032
• 负责人: 堀田 恭子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kitasato University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60214032/
• 关键词: ミクロ不均一性; 糖タンパク質; HPLC; オブアルブミン; 糖ペプチド; ダンシル; オボトランスフェリン; 個体差

糖タンパク質のミクロ不均一性を定量的に扱う試みを行った。研究の第一段階として各個体よりオブアルブミン(OVA)、オボトランスフェリン(OTF)を分離精製、続いて精製糖タンパク質をコンカナバリンAセファロースカラムにより分画した。OVAからはOA-ODの4画分がOTFからは【CA_(2-4)】の3画分が得られ、いずれの個体もこれら以外の成分を含むことはなかった。各成分比の個体間での変動幅も小さく、こういったミクロ不均一性も一定のコントロールの下に生じると考えられた。一方、分画パターン及び成分比の比較より、同一細胞で合成される両糖タンパク質間には全く相関が認められず両者の糖鎖が独立に形成されることを示している。次段階として、2つの糖タンパク質をプロナーゼ分解し、糖ペプチドを調製、ダンシル化後HPLCでマッピングを行った。OVAからは12個のピーク(1-12)が、OTFからは2個のピークが分離され、OVAピークのうち10と12がOTFのものと一致、両糖タンパク質でその不均一性の程度が全く異なることが判明した。HPLCより得られる各成分とこれまで報告されている糖鎖構造との対応付けを行った結果、クロマト上での各ピークの分離に関し、高マンノース型糖鎖は混合型糖鎖に比しより速く溶出されること、マンノース、N-アセチルグルコサミンが一残基異なる成分は相互に良く分離され、ガラクトース一残基異なるものは隣接するピークを形成する等、その特徴が明らかとなった。ピークの定量的分析の結果、ガラクトース一残基異なる成分の組み合わせ、6と7、8と9、11と12の比の間に個体間で一定の関係が認められた。この結果より、invivoでのこれら成分(6,8,11)の生合成に同一のガラクトース転移酵素が関与していることが推定され、ミクロ不均一性がこのような広い特異性を有する転移酵素により生じる可能性が示された。

试图定量地解决糖蛋白的微观分别。作为研究的第一步，将Obalbumin（OVA）和卵晶型素（OTF）与每个人分离并纯化，然后使用con舌链甲酰蛋白质柱分离纯化的糖蛋白。从OVA获得了四个OA-OD的部分，并从OTF获得了三个[Ca_（2-4）]的分数，并且没有任何个体都包含任何其他组件。个体之间每个组件比的变化也很小，人们认为这种微分均质性也发生在恒定控制下。另一方面，比较分数模式和分量比表明，在同一细胞中合成的两个糖蛋白之间没有发现相关性，并且两者的聚糖是独立形成的。下一步，将两种糖蛋白通过prinase降解，制备糖肽，然后通过HPLC映射丹酰化。 OVA具有12个峰（1-12），OTF分离了2个峰，并且发现OVA峰的10和12峰与OTF的峰一致，并且两个糖蛋白的异质性程度完全不同。由于从HPLC获得的成分与先前报道的糖链结构之间的相关性，这些特征已被揭示，在色谱上每个峰的分离，高甘露糖型糖链的高糖链比混合糖链更快，而混合糖链比混合糖链更快，而甘露糖和n-乙酰葡萄糖氨基氨基不同的组成部分与其他人的隔离均不同，并且在其他中有不同的糖尿糖链，并且相对于其他人的隔离均分离出来。峰。对峰的定量分析表明，在半乳糖残基的不同成分的组合（6和7，8和9和11和11和12）之间存在个人之间的持续关系。这些结果表明，同一半乳糖转移酶参与这些成分的生物合成（6,8,8,11）（6,8,11），表明微小差异可能导致这种较广泛的特异性转移。

项目成果

Comp.Biochem.Physiol.82B-3. (1985)

Comp.Biochem.Physiol.82B-3。

Comp.Biochem.Physiol.82B-2. (1985)

Comp.Biochem.Physiol.82B-2。

J.Chromatography. 320. (1985)

J.色谱法。