ステロイドレセプターの構造と機能

类固醇受体的结构和功能

• 批准号: 61010015
• 负责人: 村松 正実
• 金额: $ 5.89万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61010015/
• 关键词: ステロイドレセプター; ER; AR; GR; VDR; cDNA; 一次構造アミノ酸配列; リガンドアフィニティークロマトグラフィー

村松はchambonらにより発表されたヒトエストロゲンレセプター(ER)cDNAの部分構造から3種類のDNAプローグを作成し、これを用いてラット子宮cDNAライブラリーをスクリーンし、ラットERcDNAを得た。その一つはラットERの全一次構造を含んでいた。ラットERは600アミノ酸から成り、分子量67029である。このクローンをpSV2ベクターに繋いでcos7細胞に導入するとエストロゲンに対してラット子宮ERと同じ親和性を持つ蛋白質が作られた。全アミノ酸配列はヒトERと88%相同性があり、中央のDNA結合領域はヒト・ラット・ニワトリで100%保存されている事が明らかとなった。ゲノムDNAをサザンブロットで調べるとERと相同性のある配列が複数個存在する事が認められた。小林は800gのウシ子宮から数段階の精製を行なってER活性を含む700μgの蛋白質を得たが、これは65kdの主バンドの他になお10数本のバンドがみられた。島崎はヒト前立腺肥大組織からアンドロゲンの精製を試みつつある。各種クロマトグラフィーを比較した結果、DNAセファロースと17αエポキシプロピルセファロースによるリガンドアフィニティクロマトグラフィーの併用が有効である事がわかった。野間は、ラット肝よりMolybdate存在下で、PC、DEAEカラムで部分精製したGRを【^3H】-DexMesylateで共有標識し、活性化後DEAE、PCで精製し、更にSDSゲル電気泳動で30〜40%純度の標品を得た。しかし、収量は2〜3%で、一次講造を知るには不十分であった。田中は、ラット肝のGRがDEAEセルロースで3つの分画に分れることをみたが、ピークCは未熟な幼若ラット肝では見られない。高井は、ニワトリ小腸粘膜クロマチンからピリドキサーに燐酸を用いて効率よくVDRを抽出する方法を見出し、VDR精製への糸口を開いた。

Village pine は chambon ら に よ り 発 table さ れ た ヒ ト エ ス ト ロ ゲ ン レ セ プ タ ー (ER) cDNA の partially constructed か ら 3 kinds の DNA プ ロ ー グ を し, consummate こ れ を with い て ラ ッ ト uterus cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を ス ク リ ー ン し, ラ ッ ト ERcDNA を た. Youdaoplaceholder0 んで ラット ラットER ラット a complete one-time structure を contains んで た た. Youdaoplaceholder0 ER ラット 600ア ア ノ ノ acid ら ら in, molecular weight 67029である. こ の ク ロ ー ン を pSV2 ベ ク タ ー に 繋 い で cos7 cell に import す る と エ ス ト ロ ゲ ン に し seaborne て ラ ッ ト uterus ER と with じ affinity を hold つ protein が as ら れ た. All ア ミ ノ acid with column は ヒ ト ER と 88% identity が あ り, central の dna-binding domain は ヒ ト · ラ ッ ト · ニ ワ ト リ で save 100% さ れ て い る matter が Ming ら か と な っ た. ゲ ノ ム DNA を サ ザ ン ブ ロ ッ ト で adjustable べ る と ER と identity の あ る match column が plural exist す る matter が recognize め ら れ た. Xiao Lin は 800 g の ウ シ uterus か ら number Duan Jie の refined を line な っ て ER activity contains を む 700 mu g の protein を た が, こ れ は 65 kd の main バ ン ド の he に な お 10 number this の バ ン ド が み ら れ た. Shimazaki ヒト former adenocarcinoma hypertrophy tissue らア ドロゲ ドロゲ <s:1> を refined を try み み ある ある ある. Various ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を compare し た results, DNA セ フ ァ ロ ー ス と 17 alpha エ ポ キ シ プ ロ ピ ル セ フ ァ ロ ー ス に よ る リ ガ ン ド ア フ ィ ニ テ ィ ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の and が have sharper で あ る matter が わ か っ た. Wild は, ラ ッ ト liver よ り で, PC, in the presence of Molybdate DEAE カ ラ ム で part refined し た GR を 】 【 ^ 3 h - DexMesylate で DEAE after mutual identification し, activeness, PC で refined し, more に SDS ゲ ル electric 気 swimming で 30 ~ 40% purity の standard product を た. The <s:1> であった, the yield is で 2 to 3%で, and one lecture is を to know that るに るに is not very であった. は, tanaka ラ ッ ト liver の GR が DEAE セ ル ロ ー ス で 3 つ の points draw に れ る こ と を み た が, ピ ー ク C は unripe な if young ラ ッ ト liver で は see ら れ な い. Takai has retired は, ニ ワ ト リ intestinal mucosa ク ロ マ チ ン か ら ピ リ ド キ サ ー に を 燐 acid with い て sharper rate よ system く VDR を spare す る method system を see し, VDR refined へ の si open mouth を い た.

项目成果

Akimoto,S.;Sato,R.;Kodama,T.et al.: Endocrinol.Japon.33. 423-432 (1986)

Akimoto，S.；Sato，R.；Kodama，T.等人：Endocrinol.Japon.33。

Koike,S.;Nii,A.;Sakai,M.;Muramatsu,M.: Biochemistry. (1987)

小池，S.；尼伊，A.；酒井，M.；村松，M.：生物化学。

Koike,S.;Sakai,M.;Muramatsu,M.: Nucleic Acids Research. (1987)

小池，S.；酒井，M.；村松，M.：核酸研究。

Hirota,T.;Hirota,K.;Sanno,Y.;TaNaKa,T.: Endocrinology. 117. 1788-1795 (1985)

Hirota，T.；Hirota，K.；Sanno，Y.；TaNaKa，T.：内分泌学。

Hirota,T.;Hirota,K.;Sanno,Y.;Tanaka,T.: Biochem.Biophys.Acta. 843. 171-179 (1985)

广田，T.；广田，K.；山野，Y.；田中，T.：生物化学.生物物理学学报。