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CyclicAMP依存性分泌性下痢における細胞膜燐酸化過程とその抑制物質の研究

CyclicAMP依赖性分泌性腹泻细胞膜磷酸化过程及其抑制剂的研究

基本信息

批准号：
61570352
负责人：
朝倉均
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570352/
关键词：
cyclic AMP 分泌性下痢細胞膜燐酸化コレラ毒素 A-kinase

项目摘要

Cyclic AMP依存性分泌性下痢は、コレラ菌や毒素原性大腸菌などの細菌性外毒素や胆汁酸・消化ホルモンによって生じる。この分泌性下痢の腸細胞内過程について、cyclic nucleotide上昇とその後の上皮細胞内protein kinaseの活性化、および膜燐酸化過程を検討し、その抑制物質を検索した。方法は、ラット小腸粘膜を細切し超遠心を用いて刷子縁膜およびcytosol分画を精製した。cyclic nucleotideの存在化および非存在化に【^(32)P】標識ATPと反応させた。反応は20%TCAで止め、この不溶化蛋白をワットマンのガラスファイバーフィルターで捕集した。このフィルターを十分に洗滌し、膜蛋白への【^(32)P】の取り込みでA-Kinase活性を測定した。また抑制物質の検索は、in vivoに抑制物質をラットに投与した細胞膜を分離し、この細胞膜を反応系に加えた場合と、未処置ラットの細胞膜を用い、in vitro中に抑制物質を添加した場合の二方法で検討した。成積は、protein kinaseはcAMP非添加では190±16pmole【^(32)P】/mg刷子縁膜蛋白、cAMP添加で360±20であった。この特異活性比(-cAMP/+cAMP)は無処置ラットで0.53,コレラ毒素処置ラットで0.78であった。下痢抑制物質のloperamideはin vitroもin vivoもA-kinase活性に影響を与えないが、somatostatinは部分的に抑制した。イソキノリンスルフォナマイドはin vitroで抑制した。考按:loperamideにカルモジュリン阻害作用があるという報告もあり、A-kinase活性上昇後にカルシウム-カルモデュリン系がmediatorとしての可能性がある。

Cyclic AMP-dependent secretory diarrhea, bacterial exotoxins, bile acids, digestive enzymes, etc. To investigate the intracellular processes of secretory diarrhea, cyclic nucleotide increase, protein kinase activation, membrane phosphorylation and inhibitory substances in epithelial cells Methods: The mucosa of small intestine was finely cut and the cytosol was finely divided by brush. The existence and non-existence of cyclic nucleotide [^(32)P] identify ATP and anti-ATP. Anti-tumor 20% TCA, anti-tumor protein capture The activity of A-Kinase was measured in the membrane protein [^(32)P]. Two methods of inhibiting substances are discussed: in vivo, in vivo, in vitro, in vitro The accumulation of protein kinase and cAMP is 190±16pmole [^(32)P]/mg. The addition of protein and cAMP is 360±20 pmole. The specific activity ratio (-cAMP/+cAMP) was 0.53 and 0.78 respectively. Loperamide, a diarrhea inhibitor, affects A-kinase activity in vivo, and somatostatin partially inhibits it. All right, well, let's go. It is suggested that the inhibition effect of loperamide on A-kinase activity may be mediated by the increase of A-kinase activity.