潰瘍性大腸炎のT細胞レセプターとサイトカイン産生細胞の免疫組織学、遺伝子学的解析

溃疡性结肠炎 T 细胞受体和细胞因子产生细胞的免疫组织化学和遗传分析

• 批准号: 04454242
• 负责人: 朝倉 均
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04454242/
• 关键词: 潰瘍性大腸炎; サイトカイン; Vβレパトア; RT-PCR

[対象、方法]潰瘍性大腸炎活動期9名(39.5yo±14.5)、寛解期9名(33.5yo±13.2)、および健常対照9名(57.3yo±7.56)の直腸及びS状結腸粘膜の生検標本よりAGPC法によりtotal RNAを抽出した。IL-1β,IL-2,IL-2R,IL-4,CD3δとT細胞の各Vβreceptor(Vβ1-20)特異的なprimer及びoligomer probeを新たに作成し、前述のtotal RNAをreverse transcriptation-polymerase chain reaction法を用い増幅した。合成DNAは電気泳動により合成長を確認した後さらにoligomer probeによるSouthern hybridezationを施行し目的物であることを確認した。その後alkali dot blottingを同条件で行い各々のdotの放射活性を液体シンチレーションカウンターで検出し合成量を計測した。各サイトカインの発現量はCD3δ発現量によって補正し、T細胞Vβreceptorの発現量は総放射活性によって補正することにより、何れも相対的発現量(%)で表わした。 [結果]前述の方法で、各primer set間で鋳型RNA濃度と増幅DNA放射活性との間にはlog-logスケールにて実験濃度領域の直線関係が得られた。大腸粘膜局所におけるIL-1β遺伝子の発現は活動期で高く(m 3841cpm,103.9%)、寛解期(m 1886cpm,55.3%)対照(m 1996cpm,61.0%)では低い傾向にあった。またIL-4,IL-2Rに於てもその発現量は少ないものの同様の傾向を認めた。(IL-4;m 121cpm 2.6% vs,m 57cpm 1.7% vs,m 73cpm 1.6%)(IL-2R;m 554cpm 12.1% vs,m 144cpm 3.2% vs,m 247cpm 5.7%)。一方IL-2遺伝子の発現は何れの症例に於いてもほぼ認められなかった。T細胞Vβレパトアの解析では活動期粘膜内と健常粘膜内を比較したところ活動期に於いてVβ8発現量の低下傾向を認めたものの患者末血リンパ球においてもその発現量は低く明かなVβ遺伝子発現の片よりは認められなかった。 [結語]潰瘍性大腸炎粘膜局所においてそのサイトカインはTh1様のT細胞を抑制する方向を示しており、また特異的なVβT細胞の活性化も認められなかった。

[Objects and Methods] Nine patients (39.5yo±14.5) in the active stage of ulcerative colitis, nine patients (33.5yo±13.2) in the remission stage, and nine patients (57.3yo±7.56) with および normal individuals were subjected to 検 specimens of proctum and び s-like colon mucosa of the proctum. Youdaoplaceholder3 <s:1> AGPC method によ <s:1> total RNAを was used to extract た. IL-1β,IL-2,IL-2R,IL-4,CD3δとT cell <s:1> specific なprimer (Vβ1-20) and びoligomer probeを new たに were used to create <s:1> and the aforementioned <s:1> total RNAをreverse The transcriptation-polymerase chain reaction method を increments た with を. Synthetic DNA は electric 気 swimming に よ り us growth を confirm し た after さ ら に oligomer probe に よ る Southern hybridezation を し enforcement goal object で あ る こ と を confirm し た. そ の after alkali dot blotting を conditions で row い each 々 の dot の radioactivity を liquid シ ン チ レ ー シ ョ ン カ ウ ン タ ー で 検 out し を synthetic quantity measuring し た. Each サ イ ト カ イ ン の 発 now quantity は CD3 delta 発 now quantity に よ っ て corrected し V, T cell receptor beta の 発 now quantity は 総 radioactivity に よ っ て corrected す る こ と に よ り, れ も phase 発 now amount (%) of seaborne で table わ し た. [results] the foregoing の way で, between each primer set で type where と raised RNA concentration of DNA radioactivity と の between に は log - log ス ケ ー ル に て be 験 の linear concentration field masato are が should ら れ た. Large intestine mucosa bureau に お け る IL - 1 beta heritage 伝 son の 発 now high active は で く (m 3841 CPM, 103.9%), understanding solution phase (m 1886 CPM, 55.3%) according to (m 1996 CPM, 61.0%) で seaborne は low い tendency に あ っ た. The occurrence of またIL-4,IL-2Rに in て そ そ is <s:1> low な な... similar めた tend to を recognize めた. (IL-4; M-121 CPM 2.6% vs, M-57 CPM 1.7% vs, M-73 CPM 1.6%)(IL-2R; M-554 CPM 12.1% vs, M-144 CPM 3.2% vs, M-247 CPM 5.7%). One party of IL-2 has 伝 offspring, 伝 and れ cases, に in the 伝 て ほぼ ほぼ diagnosis, められな められな った. T cells V beta レ パ ト ア の parsing で は activity within the mucosa と health often intra-mucosal を compared し た と こ ろ activity に in い て V 8 発 beta now の low tendency を recognize め た も の の patients at the end of the blood リ ン パ ball に お い て も そ の 発 low amount now は く Ming か な V beta heritage 伝 son 発 is の piece よ り は recognize め ら れ な か っ た. [conclusion] ulcerative colitis mucosa bureau に お い て そ の サ イ ト カ イ ン は Th1 others を の T cells inhibit す を る direction shown し て お り, ま た specific beta な V T cells の activeness も recognize め ら れ な か っ た.

项目成果

Kazuhito Sugimura: "Analgsis of genes witheir the HLA ragion affecting suscaptibility to ulcerative colitis" Human Immernology. 36. (1993)

Kazuhito Sugimura：“HLA 区域内影响溃疡性结肠炎易感性的基因分析”人类免疫学。