权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

甲状腺細胞によるプロテオグライカン合成,特に甲状腺刺激諸活性同定への応用

甲状腺细胞合成蛋白多糖，特别是在鉴定甲状腺刺激活性方面的应用

基本信息

批准号：
61570568
负责人：
紫芝良昌
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Okinaka Memorial Institute for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1986
资助国家：
日本
起止时间：
1986 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570568/
关键词：
甲状腺培養細胞 TSH proteoglycan コンドロイチン硫酸ヘパラン硫酸

项目摘要

〔目的〕今年度は甲状腺細胞の合成するproteoglycanをcharacterizeすることを主要な目標とした。〔方法〕ラット甲状腺培養細胞(FRTL)を5%牛胎児血清を含るHAM'S F10培養液とTSH、インスリンなど6種類のホルモン(6H)を加えた培養液で培養した。実験日にTSH濃度を0,1.0,10mU/mlとしHA'MS F12培養液にかえ、72時間培養し、最後の24時間に【^(35)SO-4】、及び【^3H】-glucosamineを加えて培養した。終了後、mediumを分離し、4MGdHCl bufferを加えてproteoglycanを抽出して、cell layerはよく洗浄した後4MGdHCl、2%Tritonx-100を含む液で抽出した。Sephadex G50カラムで利用されなかった放射活性を除去しDEAE-Sephace1カラムにproteoglycanを吸着させ、0.15M〜1.5M NaCl gradientで溶出して純化精製し、そのsizeをSepharose CL6Bカラムで調べた。Chondroitin AC、ABC Lyase、亜硝酸処理、【OH^-】/【BH_4】処理の前後でカラムクロマトグラフィーを行い、これらの処理の影響から組成を調べた。またTLC、HPLCによりdisaccharideの量と【^3H】/【^(35)S】比を調べた。また、細胞中のproteoglycanを【^(35)SO-4】によりpulse labelし、0,3,8,24時間chaseしてその代謝を調べた。〔成績〕甲状腺培養細胞は2種類のproteoglycanを合成している。proteochondroitin sulfateは主として細胞外に分泌され分子量3万のglycosaminoglycan chainを平均2個、core proteinにつけた構造でdisaccharideの組成はΔDi4Sが75%、6Sが25%である。proteoheparan sulfateは同じく分子量3万のglycosaminoglycan chainを平均3本core proteinにつけた構造である。双方のproteoglycan共にTSHや【(Bu)_2】cAMPにより用量反応性にその合成が増加するが質的変化は伴わない。TSHにより合成のみでなくproteoglycan sulfateのdegradationも増加する。〔結論〕甲状腺細胞でproteoglycanが活発に合成され代謝されていることがはじめて示された。

[Purpose] The main goal of this year is to synthesize and characterize proteoglycan thyroid cells. [Method] FRTL cultured thyroid cells (FRTL) containing 5% fetal bovine serum containing HAM'S F10 culture medium and TSH, インスリンなど6 types of のホルモン(6H) and をadded えた culture medium and culture した. The TSH concentration of the day was 0, 1.0, 10mU/ml and HA'MS F12 culture medium was used, 72 hours of culture was used, and the last 24 hours was cultured with [^(35)SO-4], and [^3H]-glucosamine was added with culture. After completion, the medium was separated, 4MGdHCl buffer was added and proteoglycan was extracted, and the cell layer was washed and 4MGdHCl and 2% Tritonx-100 containing liquid were extracted. Sephadex G50 カラムで Utilizes されなかったradioactive をremovalしDEAE-Sephace1カラムにproteoglycanをsorptionさせ、0.15M~1.5M NaCl Gradient dissolution, purification and refinement, Sepharose CL6B, adjustment. Chondroitin AC, ABC Lyase, nitric acid treatment, [OH^-]/[BH_4] before and after treatment, でカラムクロマトグラフィーを行い, これらのtreatment のeffect and composition をadjusted べた.またTLC, HPLCによりdisaccharideのquantityと【^3H】/【^(35)S】ratioを Adjustmentべた.また、Proteoglycanを【^(35)SO-4】によりpulse labelし in the cell、0,3,8,24 time chaseしてそのmetabolismを Adjustmentべた. [Results] Two types of thyroid cultured cells were synthesized using proteoglycan. Proteochondroitin sulfate is mainly secreted outside the cell, molecular weight is 30,000, glycosaminoglycan chain is averaged 2, core protein structure is disaccharide, composed of ΔDi4S, 75%, 6S, 25%, である. Proteoheparan sulfate は Same じく molecular weight 30,000 の glycosaminoglycan chain を average 3 core protein につけた structure である. Both sides of the proteoglycan have a total amount of TSH [(Bu)_2] cAMP and a dosage of anti-reflexivity and a synthesis of the proteoglycan and the quality of the proteoglycan. TSH is a synthetic proteoglycan sulfate degradation product. [Conclusion] Thyroid cells can activate proteoglycan, synthesize and metabolize it, and use it as a proteoglycan.