ラット肝グルクロン酸転移酵素の多様性に関する研究

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我々は、Wistar系ラットのなかにAndrosterone(AD)に対するグルクロン酸抱合能が欠損しているミュータント(LAラット)を発見し、高抱合酵素活性(HAラット)が優先遺伝であること、LAラットにはADを抱合するグルクロン酸転移酵素(GT)が欠損していることを報告した。現在、ラット肝には重複した広い基質特異性を示す3-6種類のGTイソ酵素が存在すると考えられている。今回、我々はGTの多様性を検討する目的で、Tephlyらの方法に準じてLAおよびHAラット肝からChromatofocusing,UDP-hexanolamine Sepharose4B affinity chromatographyによりGTを分離精製して、イソ酵素を比較検討した。HAラットでは、Testosterone(TS)GT活性はpH8.4と8.0の2分画に、AD GT活性はpH8.0と7.4の2分画に存在した。一方、LAラットではTS GT活性はpH8.4分画のみに存在し、AD GT活性を示す分画は認められなかった。1-Naphthol(NT)GT活性は、HAラットではpH8.7,8.4および7.7の3分画にあり、pH8.4分画が最も強い活性を示した。LAラットでは、pH8.7分画に最も強いNT GT活性が存在し、pH8.2附近に弱いショルダーがあった。また、1-Naphthylamine(NA)を基質として測定すると、ほぼNTと同じ分画に酵素活性が存在した。一方、肝ミクロソーム分画を用いて上記基質に対するGT活性を測定すると、LAおよびHAラット間にはAD GT以外のGT活性に有意差は認められなかった。以上の結果は、2つの可能性を示唆している。1)両ラット群間にGTイソ酵素の量的,質的な差が存在する。2)GTは50-59kDのサブユニットからなるオリゴマーであると考えられており、異なるGTイソ酵素同志がアグリゲートまたはハイブリッドを形成するために、見掛けの多様性が存在する。この場合は、AD GTと他のGTとの相互作用がLAラットにはないので、HAラットとは異なるGTの分離パターンを示すと考えられる。現在、いずれの可能性が正しいか検討中である。