ステロイド硫酸転移酵素遺伝子の染色体マッピング

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硫酸転移酵素(ST)は重要な薬物代謝酵素の1つであり、ステロイド、フェノール、芳香族アミン等をそれぞれ主な基質とするイソ酵素の存在が知られている。最近、数種のSTcDNAが単離されており、我々の研究室ではdehydroepiandrosteroneやcortisol等を抱合するラットST40cDNA、ST20cDNA等を単離している。今回、我々はラットのヒドロキシステロイドSTの遺伝情報をコードしている♯124cDNAをプローブとして、FISH法により染色体マッピングを行った。♯124cDNA(1.5kbp)をpUC118vectorに組込み、nick translation法によりビオチン標識してプローブとした。雄性Wistar系ラットの肺の繊維芽細胞を取り、methotrexateを用いて同調培養を行い、prometaphase chromosomesを調製した。次に、ビオチン標識プローブと調製したchromosomesとhybridizationを行った。これにFITC-avidin処理を行い、シグナルを増強するためにbiotynylated anti-avidinと反応させたあと、FITC-avidin処理を行い、propidium iodideで染色し、蛍光顕微鏡でシグナルを観察した。24の標本中12の標本で特定の染色体にシグナルが存在していた。一方、ビオチン標識したpUC118 vectorだけをプローブとして使用したときは、そのようなシグナルは観察されなかった。しかし、シグナルがやや弱いので、PCR法によりプローブのビオチン標識を行い、調製したchromosomesとhybridizationを行ったところ、シグナルが増幅して観察されることが判ったので、その後はPCR法で調製したプローブを用いたhybridizationに変更している。遺伝子座の位置は、シグナルを観察した標本を洗浄し、chromosomesをQ-band法で染色して検討しているところである。この成果は、日本生化学会年会で報告し、専門誌に投稿する予定である。