脱窒光合成細菌の一酸化窒素(NO)還元酵素の分離精製とその性質

反硝化光合细菌一氧化氮还原酶的分离纯化及其性质

• 批准号: 62540510
• 负责人: 佐藤 敏生
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62540510/
• 关键词: 一酸化窒素還元酵素; 脱窒光合成細菌; チトクロームbc1複合体; ドデシルマルトシド

自然界の窒素循環で重要な役割をしている脱窒の機構のうち, 一酸化窒素(NO)還元の機構はほとんど明らかでない. 特にNO還元酵素(NOR)の酵素化学的実体については全くわかっていない. 私達は脱窒光合成細菌Rhodobacter sphaeroides f.s. denitrificansの脱窒の機構を調べてきたが, 今回NORを分離精製することを試みた.光にNORはチトクロームbc1複合体(bc1 complex)上にあると推定される結果を報告したが, 今回Trumpowerらのdodecylmaltosideをdetergentとしてbc1 complexを調整する方法を採用し, NORはbc1 complexとは異なるfraction(Reaction centerを含む)に依存する事が認められた. 脱窒光合成培養したcellからクロマトフォアを調整し, dodecylmaltosideが可溶化後, DEAE Biogel AクロマトグラフィーでNOR fractionとbc1 complex fractionに分離した. 両fractionは更にDEAE Sepharase CL6B, Sepharose 6Bクロマトグラフィーで精製した. NOR活性, Ubiquinol:cytochrome C reductase活性の回収率はそれぞれ7%, 5%であった. NOR fractionにもcyt.b,cは存在しその比は約1:2で, bc1complexのcyt.b,cのcyt.b,cの比は2:1であった.SDSPAGEにより両fractionを構成するペプチドの分析で, bc1 complexは報告の通りcyt.b,c1,FeS protein,13 kDa proteinより構成され, NOR fractionにはFeS protein,13 kDa proteinは無く, cyt.b,c1のバンドとReaction centerのH,M,L subunitと, さらに45kDaと38kDaのバンドが認められた. NOR fractionについてはさらにPhenylsepharose CL4Bの疎水クロマトグラフィーを行うと, NOR活性は3%Tween20または1%Triton X100で溶出され, そのfractionに上記の45kDa, 38kDaのpolypeptideが存在した. 2つのpolypeptideの一方がNORと関係あるものと推定した.

Nature's chemical cycle is an important mechanism for removing oxygen from the environment, and an important mechanism for removing oxygen from the environment. Special NO reducing enzyme (NOR) and enzyme chemistry in vivo. Rhodobacter sphaeroides f.s. Denitrificans are isolated and purified by the mechanism of their isolation. The results of the estimation of NOR on bc1 complex are reported, and the method of adjusting NOR on bc1 complex is adopted. NOR on bc1 complex is dependent on fraction(Reaction center). DEAE Biogel A is isolated from the cell by NOR fraction and bc1 complex fraction after solubilization with dodecylmaloside. DEAE Sepharose CL6B, Sepharose 6B, DEAE Sepharose CL6B, DEAE Sepharose CL6B NOR activity, Ubiquinol:Cytochrome C reductase activity recovery rate is 7%, 5%. The ratio of NOR fraction to cyt.b,c is about 1:2. The ratio of bc1 complex to cyt.b,c to cyt. b,c is about 2:1.SDSPAGE analysis shows that bc1 complex is reported to be composed of cyt.b,c1,FeS protein,13 kDa protein. NOR fraction is reported to be composed of FeS protein, 13 kDa protein. Cyt.b,c1 is reported to be composed of H,M,L subunit. NOR fraction was determined by the presence of Phenylsepharose CL4B, NOR activity 3%Tween20 and 1%Triton X100, NOR fraction 45kDa, 38kDa polypeptide. 2. A party to a polypeptide has a NOR relationship.