权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

糖蛋白質のアスパラギン結合糖鎖生合成に関与する酵素系についての研究

糖蛋白天冬酰胺连接糖链生物合成酶系统的研究

基本信息

批准号：
62570111
负责人：
本川雄太郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

真核細胞の糖蛋白質のうち, アスパラギンに結合している糖鎖の生合成にはmannosylphosphodolichol(Dol-P-Man)が反応中間体として重要であることが明らかにされている. 我々は既にDol-P-Man合成を触媒する酵素をニワトリ肝ミトコンドリアから可溶化し, その性質を報告したが, 今回Dol-P-Manを分解する酵素がニワトリ肝ミクロゾームとミトコンドリアに存在することを初めて明らかにした. この酵素の触媒作用によって, Dol-P-Manからmannoseが生成される.酵素をミクロゾームからエマルゲンー909を含む緩衝液によって可溶化し, DEAE-cellulose及びSepharose 6Bを用いたクロマトグラフィーによって約58倍に精製した. 酵素はSH基保護剤を必要とし, これが無いと非可逆的に失活した. 反応にはCaCl_2の添加が必要であった. Dol-P-Manに対するKm値は0.43μMであった. 反応はDolichyl phosphateにより拮抗的に阻害され, そのKi値は12.5μMであった.部分精製酵素はN-acetylglucosaminyldiphosphodolichol,glucosyl phosphoryl dolichol,mannose-l-phosphateには作用せず, またmannosidase,glucosidase,acid phosphatase,acid phosphodiesterase活性は示さなかった.この酵素を安定化する熱に安定な蛋白質と思われる物質が分離されたが, 性質の詳細については検討中である. またこの酵素がDol-P-Man量の調節に関与する可能性についても検討中である.設備備品として購入したマイクロ冷却遠心機とロータリーシェイカーは酵素活性測定の際に, また電気泳動用電源(クロスパワー)は反応産物の分離同定などに有効に利用されている.

Eukaryotic glycoproteins are important intermediates in mannosylphosphodol (Dol-P-Man) biosynthesis. We report the properties of Dol-P-Man enzymes that catalyze Dol-P-Man synthesis, and we report the existence of Dol-P-Man enzymes that catalyze Dol-P-Man decomposition. This enzyme catalyzes the formation of mannose, Dol-P-Man and mannose. The enzyme is soluble in buffer solution containing DEAE-cellulose and Sepharose 6B and purified by about 58 times. Enzyme SH base protection is necessary, and there is no irreversible inactivation. The addition of CaCl_2 is necessary. Dol-P-Manに対するKm値は0.43μMであった. The Ki value of anti-dolichyl phosphate was 12.5μM. Some of the purified enzymes are active in N-acetylglucosaminyldiphosphodol,glucosyl phosphoryl polyol,mannose-l-phosphate, mannosidase,glucosidase,acid phosphatase,acid phosphoesterase. This enzyme stabilizes, heat stabilizes, proteins isolate, and properties in detail. The regulation of Dol-P-Man levels of these enzymes is related to the possibility of a change in the process. The equipment is purchased from a cooling remote control unit and used for enzyme activity determination.