リポ酸転移反応の機構に関する研究

硫辛酸转移反应机理研究

• 批准号: 08670150
• 负责人: 本川 雄太郎
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670150/
• 关键词: リポ酸転位酵素; リポ酸

リポ酸はグリシン開裂酵素系のH-蛋白、ピルビン酸、アルファケトグルタン酸及び分枝鎖ケト酸脱水素酵素複合体のアシルトランスフェラーゼの補欠分子族として、それら蛋白質の特定のリシン残基のイプシロンアミノ基に結合している。リポ酸が蛋白質に結合する反応は、リポ酸転移酵素によって触媒される。我々は既にウシ肝ミトコンドリアからリポ酸転位酵素を精製し、2種のアイソフォーム(I型とII型)を得ている。アミノ酸配列をリポ酸転移酵素I型についてはN末端から20残基まで、II型についてはN末端から30残基まで決定した。リポ酸転移酵素I型はN末端に更にアスパラギンが結合している以外II型のN末端アミノ酸配列と差異はなかった。リポ酸転移酵素II型のN末端から13-18残基及び25-29残基のアミノ酸配列から推定される塩基配列を用いて、2種のプローブを作製した。^<32>Pで標識したプローブを用いてウシ肝cDNAライブラリーをスクリーニングし、両プローブとハイブリダイズするクローンを得た。このクローンに含まれるcDNAの長さは1.3kbpであり、リポ酸転位酵素の全コーディングシークエンスを含むものと考えられる。その塩基配列について今後解析を進め、リポ酸転移酵素のアミノ酸配列を決定すると共に、大腸菌中で酵素を発現させ、その抗体を作製し、リポ酸転位酵素の諸性質や触媒反応機構を更に追究する予定である。

H-protein, protein Protein binding reaction, acid transfer enzyme reaction The enzyme was purified and two kinds of enzymes (type I and type II) were obtained. The amino acid sequence is determined by 20 residues at the N-terminus of type I and 30 residues at the N-terminus of type II. The N-terminal amino acid sequence of type I is different from that of type II. The N-terminal residues 13-18 and residues 25-29 of the enzyme type II were identified by the putative nucleotide sequences. <32>P. S. A. S. A. S. S. A. S. S. The length of cDNA contained in this gene is 1.3kbp, and the length of cDNA contained in this gene is 1.3kbp. Further analysis of the nucleotide sequence, determination of the nucleotide sequence of the enzyme, production of the enzyme in E. coli, production of the antibody, characterization of the nucleotide sequence of the enzyme, and determination of the catalytic mechanism

项目成果

Kazuko Fujiwara: "Lipoylation of acyltransferase components of α-ketoacid dehydrogenase complexes." J.Biol.Chem.271. 12932-12936 (1996)

Kazuko Fujiwara：“α-酮酸脱氢酶复合物的酰基转移酶成分的脂酰化。”J.Biol.Chem.271（1996）。