ヒト肥満細胞の長期試験管内培養とその分化, 増殖機序に関する研究

人肥大细胞长期体外培养、分化及增殖机制研究

• 批准号: 62570280
• 负责人: 田所 憲治
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570280/
• 关键词: 肥満細胞; 分化; 増殖; 長期培養; インターロイキンー3; インターロイキンー4; 好塩基球; 液体培養; メチルセルロース培養

ヒト肥満細胞の長期試験管内培養とその分化増殖機序の解明を目的に1.ヒトインターロイキンー3(IL-3), IL-4の骨髄由来ヒスタミン含有細胞(HCC)の増殖, 長期維持効果の検討, 2.マウス肺肥満細胞のメチルセルロース培養, 3.ヒト肺肥満細胞の培養条件の検討を行った. 結果:1.ヒト骨髄単核球をIL-3, IL-4の刺激下で液体培養したところ, IL-3は単独でHCCを濃度依存的に分化増殖させた. IL-4は単独では分化増殖能はなかったが, IL-3によるHCCの分化増殖を濃度依存的に亢進した. 培養HCCは円形, 分葉した核を持ち, 顆粒はトルイジン青, アルシャン青染色陽性で, サフラニン染色陰性であった. 電顕的にもelectron-denseな顆粒を認め, その性状はIL-3単独, IL-3+IL-4のいずれの方法で刺激したものも好塩基球に特異的な顆粒状で肥満細胞の顆粒を持つものはなかった. またIL-4は培養初期にのみ働らき, HCCは培養2〜3週目を最高に以後減少し, HCCの長期維持は出来なかった. 現条件ではマウスと異なり, 骨髄より肥満細胞を培養するのは困難と考えられた. 2.成熟肥満細胞を直接培養すべく, まずマウス肺肥満細胞を酵素処理, Percoll遠心法で分離, 濃縮メチルセルロース培養を行ったところ, Pokeweed mitogen刺激脾細胞上清の刺激で粘膜型肥満細胞が培養された. 3.同様の方法でヒト肺より分離され肥満細胞をメチルセルロース培養法, 液体培養法, 線維芽細胞との混合液体培養法で, IL-3+IL-4の刺激下で培養した. 現在までのところ, 前二者の方法では肥満細胞の増殖を認めていない. 混合培養法では長期維持は可能で, 被刺激対照とは差があるものの, IL-3, IL-4によっても培養前値以上の肥満細胞数, ヒスタミン含有量を増加を見ていない. マクロファージ, 線維芽細胞もIL-4受容体を持つことも知られており, より純化した肥満細胞を用いるなどの培養条件の検討をさらに進める予定である.

Objective: 1. To investigate the growth and long-term maintenance of HCC cells by long-term in vitro culture of HCC cells; 2. To investigate the culture conditions of HCC cells; 3. To investigate the culture conditions of HCC cells. Results:1. IL-3 and IL-4 stimulated the proliferation of HCC cells in liquid culture. IL-3 alone induced the concentration-dependent proliferation of HCC cells. IL-4 alone can differentiate and proliferate HCC cells, while IL-3 can differentiate and proliferate HCC cells in a concentration-dependent manner. Culture HCC is round shape, leaf division, nucleus, granule, green stain positive, green stain negative. The characteristics of electron-dense cells are IL-3 alone, IL-3+IL-4 alone and IL-3 +IL-4 alone. IL-4 was detected at the initial stage of culture, and HCC reached the highest level after 2 ~ 3 weeks of culture. The present conditions are different, and it is difficult to culture the cells. 2. Mature fat cells are cultured directly, lung fat cells are treated with enzymes, Percoll cells are isolated remotely, concentrated and cultured. Pokeweed mitogen stimulates spleen cell supernatant and stimulates mucosal fat cells to culture. 3. The same method was used to isolate and culture the cells in vitro, liquid culture method, mixed liquid culture method for the cells in vitro, IL-3+IL-4 stimulation. Now, the first two methods are to increase cell proliferation. Mixed culture method is not long-term maintenance is possible, stimulated by light and different, IL-3, IL-4, before culture above the number of fat cells, the content of fish increased. The culture conditions of IL-4 receptor in cell culture were studied.