ウシ歯髄コラゲナーゼインヒビターに対するモノクローナル抗体の調製とその応用

抗牛髓胶原酶抑制剂单克隆抗体的制备及其应用

• 批准号: 62570849
• 负责人: 早川 太郎
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Aichi Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570849/
• 关键词: モノクローナル抗体; コラゲナーゼインヒビター; ウシ歯髄; サンドイッチ酵素免疫測定法; アフィニティーカラム; 免疫組織学的局在

1.モノクローナル抗体(Mab)を用いた免疫組織学的研究-ウシ未萌出歯髄コラゲナーゼインヒビター(CI)に対するMabによる染色像は, 歯髄細胞の細胞質内およびマトリックスのコラーゲン線維に沿って陽性反応を示した. ヒト歯髄でもウシの場合とほゞ同じ所見であった. 電顕的には, ヒトの場合, 歯髄細胞の細胞質にほゞ瀰漫性に, また細胞膜に沿って比較的強い反応が見られた. 粗面小胞体の内腔は必ずしも強い反応を示さなかった. 細胞間マトリックスの反応は, 不定形, あるいは, 小顆粒状を呈し, コラーゲン線維を囲むように存在していた.2.Mab-セファロース4Bアフィニティーカラムを用いて, ウシ歯髄培養液中のCIのみを特異的に吸着させた. その溶出画分はSDS-PAGE上で単一バンド(分子量32K)を示し, ワン・ステップでCIを単一な状態まで精製できることを明らかにした.3.CIのサンドイッチ酵素免疫測定法(SEIA)-前述したヒトと交又反応する4種のMabのうち, 抗原上の異なったエピトープを認識する1組のMabを用い, 一方を1次抗体として固相に, 他方をFab-ペルオキシダーゼとして2次抗体に用いてSEIAを確立した. この方法は極めて高感度で, ウシCIでは1pg, ヒトCIでは1.5pgが定量限界である. この定量法を用いて種々ヒト正常体液についてCIを測定し, 血清で183±30ng/ml(平均±SD), 血漿62±12, 脳脊髄液60±13, 羊水1,780±969, 尿7±8などの値を得ている. 現在, さらに種々疾患時の血清について検索中である.

1. モ ノ ク ロ ー ナ ル antibody (Mab) を い た immune histological study - ウ シ did not appear 歯 marrow コ ラ ゲ ナ ー ゼ イ ン ヒ ビ タ ー (CI) に す seaborne る Mab に よ る dyeing like は, 歯 marrow cell cytoplasm お の よ び マ ト リ ッ ク ス の コ ラ ー ゲ ン line d に along っ て positive anti 応 を shown し た. ヒ ト 歯 marrow で も ウ シ の occasions と ほ ゞ seen with じ で あ っ た. Electric 顕 に は, ヒ ト の occasions, 歯 の marrow cell cytoplasm に ほ ゞ diffuse に, ま た membrane に along っ て comparison い reverse 応 が see ら れ た. Rough surface vesicular body の lumen は will ず し も い reverse 応 を shown さ な か っ た. Intercellular マ ト リ ッ ク ス の anti 応 は, amorphous, あ る い は, small granular を し, コ ラ ー ゲ ン line d を 囲 む よ う に exist し て い た. 2. The Mab - セ フ ァ ロ ー ス 4 b ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム を with い て, ウ シ 歯 の in marrow cultures of CI の み を specific に sorption さ せ た. そ の dissolution draw points は sds-page で 単 a バ ン ド (molecular weight 32 k) を し, ワ ン · ス テ ッ プ で CI を 単 a な state ま で refined で き る こ と を Ming ら か に し た. 3. CI の サ ン ド イ ッ チ enzyme immunoassay (SEIA) - the foregoing し た ヒ ト と pay back 応 す る four の Mab の う ち, antigen の on different な っ た エ ピ ト ー プ を know す る 1 group の Mab を い, Side を 1 antibodies と し て solid-phase に, fang を overall ペ ル オ キ シ ダ ー ゼ と し て two antibodies に with い て SEIA を establish し た. こ の way は extremely め て Gao Gan で, ウ シ CI で は 1 pg, Quantitative limit ヒ ト CI で は 1.5 pg が で あ る. こ の を quantitative method with い て kind 々 ヒ ト normal に つ い て CI を し, serum で 183 + 30 ng/ml (mean + / - SD), plasma 62 + 12, marrow fluid 60 + 13 脳 ridge, amniotic fluid 1780 + 969, Urine 7±8な <s:1> <s:1> <s:1> value を て る る. Now, さらに kinds of 々 diseases are present in the である of the <s:1> serum に て検 て検 て検 cord.

项目成果

Kodama, S., Kishi, J., Obata, K., Iwata, K. and Hayakaya, T: Collagen and Related Research Clinical and Experimental. 7. 341-350 (1987)

Kodama, S.、Kishi, J.、Obata, K.、Iwata, K. 和 Hayakaya, T：胶原蛋白及相关研究的临床和实验。