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生物燃料直接醗酵菌の育種

生物燃料直接发酵菌的选育

基本信息

批准号：
62603020
负责人：
岡田弘輔
金额：
$ 14.59万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.醗酵菌に導入すべき遺伝子のクローン化と酵素の改良. 生でん粉分解能を有する細菌を土壌等より広く分離し, 約200株を得た. そのうち5株は高い活性を有していた. さらにその1株について酵素の性質を詳細に検討した(分担者:鵜高). Baeillus Subtilis のセルラーゼ遺伝子をShot qun2法によりB.subtilisにクローン化し, 2.2-kbまで切り縮めた断片について塩基配列を決定した. 一方精製したセルラーゼのN末端領域のアミノ酸配列から本酵素は36アミノ酸残基からなるシグナルを含む499のアミノ酸からなることがわかり, その配列を推定した(分担者:別府). B.pumilusのキシラナーゼと, βキシロシダーゼの遺伝子をクローン化し, 両者遺伝子の塩基配列を決定した. キシラナーゼには27アミノ酸残基からなる分泌シグナルを含む228アミノ酸からなり, 成熟キシラナーゼは201アミノ酸からなっている. キシラナーゼ遺伝子を酵母の2因子の分泌シグナルに継いて酵母, Saccharomyces cerevisiaeに導入すると, キシラナーゼの生産は認められたが, 量的には不充分であった(分担者:岡田).2.醗酵菌の宿主ベクター系の確立. Zymomonas属細菌の宿主ベクター系を開発するためにZymomonasでの形質転換法を開発した. またZymomonasで高発現させるために必要なプロモーターを分離し, その塩基配列を決定した(分担者:外村). 高温でエタノールを生産するS.cerevisiaeT,J3株を得, 35°Cで11%以上のエタノール蓄積に成功し, さらに細胞融合法により35°Cで12.6%エタノールを蓄積する株の分離に成功した(分担者:吉田)3.新能力の醗酵菌への導入. S.diastaticuaとS.fiburigeraよりグルコアミラーゼ, α-アミラーゼおよびセロビアーゼを単離し, セロビアーゼ遺伝子を導入したS.cerevisiaeはセロビオースを直接醗酵する能力を有することが判った(分担者:宮川).

1. Improvement of the enzyme for the transformation of the gene into the yeast. About 200 strains of bacteria were isolated from the plant. 5 plants with high activity. A detailed study of the properties of the enzyme in 1 strain (Contributor: Yugao). Baeillus Subtilis and its Fragments Shot Qun2 Method to Determine the Base Alignment of B.Subtilis A purified protein was identified from the N-terminal region of the enzyme by acid sequence analysis (Contributor: Beppu). B.Pumilus and its derivatives are transformed and the base alignment of the derivatives is determined. 27. The acid residue is contained in 228. The acid residue is contained in 201. 2. Establishment of the host system of Saccharomyces cerevisiae. Development of Zymomonas Host System; Development of Zymomonas Morphological Transformation Zymomonas is the most important factor in the development of the disease. S.cerevisieT,J3 strain was successfully isolated by cell fusion method at 35 ° C and 12.6% of strain was successfully accumulated (Contributor: Yoshida)3. Introduction of new ability of yeast. S.diastaticua and S.fiburigera are the first to introduce S.cerevisiae into the system, and the second to introduce S.cerevisiae into the system.(Contributed by Miyagawa)