慢性骨髄性白血病の慢性期におけるチロシン・キナーゼ不活化機序

慢性粒细胞白血病慢性期酪氨酸激酶失活机制

• 批准号: 01015076
• 负责人: 西村 純二
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015076/
• 关键词: 慢性骨髄性白血病; P210^<bcr@abl>蛋白; チロシン・キナーゼ; ホスホチロシン・ホスファターゼ

Ph^1転座に伴うbcr/abl fusion遺伝子に由来するP210^<bcr/abl>(P210)蛋白はチロシン・キナーゼ活性を有し、慢性骨髄性白血病(CML)の病因や急性期への進展との関係が注目される。われわれはP210機能の細胞内調節、特に分化に伴う抑制機構を明かにするために、抗ホスホ・チロシン抗体および抗abl抗体を用い、CML細胞株K562のP210を分離し、細胞内のホスホチロシン・フォスファターゼ活性(PTPase)およびチロシン・キナーゼ阻害活性(PTKーI)を検討した。1.抗体の作製:抗ホスホ・チロシン抗体はホスホチラミンーKLH複合体を、抗abl抗体は合成ペプチド(SerーAspーGluーValーGluーLysーGluーLeuーGlyーLys)ーチログロブリン複合体をそれぞれ家兎に免疫し作製した。これらの抗体はいずれもK562細胞のP210を特異的に沈降させた。2.PTPase活性:K562細胞より抗ホスホ・チロシン抗体にてP210蛋白を分離し、in vivoあるいはin vitroでチロシンをリン酸化させ、細胞中のPTPaseの基質とした。PTPaseは慢性期CML細胞、正常好中球に認められたが、CML細胞株K562,RMー10,Pl90^<cーabl>を発現するMR87や正常リンパ球には認められず、細胞分化にともなうP210のチロシン・キナーゼの抑制との関連が示唆された。このPTPaseはZn^<2+>でのみ阻害され、Na_3VO_4,NaF,PNPP,EDTA等では影響されなかった。また膜PTPaseであるCD45に対する抗体にても中和されなかった。3.PTKーI活性:K562細胞より抗abl抗体にてP210蛋白を分離し、immune complex kinase assayの阻害により、PTKーIを測定した。PTKーI慢性期CML細胞、正常好中球の他にK562,RMー10,MR87にも認められたが、この活性は細胞可溶分画によるATP分解の可能性を否定できず、更に検討を要する。成熟顆粒球PTPaseのP210キナーゼ抑制への関与が示唆される。

The origin of the Ph^1 locus associated bcr/abl fusion gene and the relationship between its activity and the etiology and progression of acute phase of chronic osteoblastic leukemia (CML) have been noted. The intracellular regulation of P210 function, specific differentiation and inhibition mechanism were investigated. Anti-tumor antibodies and anti-abl antibodies were used. CML cell line K562 and P210 were isolated. Intracellular tumor activity (PTK) was investigated. 1. Antibody production: Anti-Ser-Glu Val-Glu Lys-Glu Leu-Gly-Lys-Anti-Ser-Glu complex production These antibodies are specifically targeted to K562 cells and P210 cells. 2. PTase activity: P210 protein isolated from K562 cells by anti-tumor antibody, in vivo, in vitro, in vitro and in vitro. PTase was found in CML cells in chronic phase and normal phase, and in CML cell line K562,RM-10, Pl90. PTase was found in CML cells in chronic phase and normal phase. PTase was found to be associated with the inhibition of P210 in cell differentiation. The effects of Zn, Na_3VO_4, NaF, PNPP and EDTA on the growth of PtP were studied. CD45 is the most potent antibody in the world. 3. PTK-I activity:K562 cells were isolated from P210 protein by anti-abl antibody, and PTK-I activity was measured by immune complex kinase assay. PTK-I chronic phase CML cells, normal cells and other K562, RM10, MR87 cells are recognized as active cells, and the possibility of ATP decomposition is discussed. P210 of mature granulocytes is related to inhibition and expression.

项目成果

Hiroyuki TAKAHIRA et al.: "Reduction in the expression of P210^<bcr/abl> in the CML cells,KUー812ーF during both erythroid and granuloid lineage differentiation." Leukemia Research.

Hiroyuki TAKAHIRA 等人：“红细胞和粒细胞白血病研究期间 CML 细胞 KU-812-F 中 P210^<bcr/abl> 的表达减少。”

Keisuke SHIBATA et al.: "Alterations of thrombinーinduced protein tyrosine phophorylation in platelets from patients with chronic myelogenous leukemia."

Keisuke Shibata 等人：“慢性粒细胞白血病患者血小板中凝血酶诱导的蛋白质酪氨酸磷酸化的改变。”

Junji NISHIMURA et al.: "Characterization of phosphotyrosine phosphatase for P210^<bcr/abl> in mature myeloid cells."

Junji NISHIMURA 等人：“成熟骨髓细胞中 P210^<bcr/abl> 磷酸酪氨酸磷酸酶的表征。”

Keisuke SHIBATA et al.: "Interferonーmekifies phosphorylation of P210^<bcr/abl> during heminーinduced differentiation in K 562 cells."

Keisuke SHIBATA 等人：“在氯高铁血红素诱导的 K 562 细胞分化过程中，干扰素可促进 P210^<bcr/abl> 的磷酸化。”

Keisuke SHIBATA et al.: "Phosphotyrosine phosphatase activity prevents the detection of P210^<bcr/abl> ptotein in mature cells in chronic myelogenous leukemia even by an immunoblotting technique." Leukemia. 3. 615-619 (1989)

Keisuke SHIBATA 等人：“即使通过免疫印迹技术，磷酸酪氨酸磷酸酶活性也会阻止慢性粒细胞白血病成熟细胞中 P210^<bcr/abl> 蛋白的检测。”