胎児神経系の発育分化過程におけるNerve growth Factor(NGF)の意義に関する研究

昨年度までは、NGFの受容体およびtyrosine hydroxhlase活性に及ぼすNGFの作用を、ラットの神経組織(とくに神経節)において、そのontogenityに伴う変化をみながら検討した。本年度は、肝仔神経組織におけるNGFをmolecular biologyの側面から検討することを目的とした。1)NGFmRNA検出用のoligo nucleotide probeの作成。β-NGFを構成する100番目から116番目までのアミノ酸に対応する塩基配列を選択し、Applied Biosystems Model 380AのDNA合成機によりmRNAに相補的なDNAを合成し、polyacry Comid gel etectrophoresisにより精製後、〔γ-^<32>P〕ATPにて末端をラベルしてpurobeとして。2)ラット胎仔神経組織におけるmRNAのontogeny各胎令のラット胎仔の脳を摘出後直ちに液体窒素にて凍結、保存した。crystsstatにて切片作成後、in situ hyfridizationを行う予定であったが、ひと胎盤性NGFについて、まず、このprobeが有用であるか否かを予備実験的に確認することとした。ヒト胎盤にNGFが存在することはこれまでの我々の研究で確認されている。ヒト胎盤からmRNAを抽出して、Nothern blottingを施行すると、1.3kb相当の位置に濃いシグナルが認められ、NGFmRNAによるものと考えられた。したがって、このprobeを用いて、この条件設定の中で、胎仔神経組織でのNGFmRNAのNothern blottingおよびin situ hyfvidizationの実験が可能であることが判明した。3)ラット胎仔の神経節におけるNGF受容体の変化、およびtyroseine hydroxyCase活性に及ぼすNGFの影響本年度も、一部追加実験を行ったが、昨年度の結果とほぼ同様であった。

昨年度までは、NGFの受容体およびtyrosine hydroxhlase活性に及ぼすNGFの作用を、ラットの神経組織(とくに神経節)において、そのontogenityに伴う変化をみながら検討した。本年度は、肝仔神経組織におけるNGFをmolecular biologyの側面から検討することを目的とした。1)NGFmRNA検出用のoligo nucleotide probeの作成。β-NGFを構成する100番目から116番目までのアミノ酸に対応する塩基配列を選択し、Applied Biosystems Model 380AのDNA合成機によりmRNAに相補的なDNAを合成し、polyacry Comid gel etectrophoresisにより精製後、〔γ-^<32>P〕ATPにて末端をラベルしてpurobeとして。2)ラット胎仔神経組織におけるmRNAのontogeny各胎令のラット胎仔の脳を摘出後直ちに液体窒素にて凍結、保存した。crystsstatにて切片作成後、in situ hyfridizationを行う予定であったが、ひと胎盤性NGFについて、まず、このprobeが有用であるか否かを予備実験的に確認することとした。ヒト胎盤にNGFが存在することはこれまでの我々の研究で確認されている。ヒト胎盤からmRNAを抽出して、Nothern blottingを施行すると、1.3kb相当の位置に濃いシグナルが認められ、NGFmRNAによるものと考えられた。したがって、このprobeを用いて、この条件設定の中で、胎仔神経組織でのNGFmRNAのNothern blottingおよびin situ hyfvidizationの実験が可能であることが判明した。3)ラット胎仔の神経節におけるNGF受容体の変化、およびtyroseine hydroxyCase活性に及ぼすNGFの影響本年度も、一部追加実験を行ったが、昨年度の結果とほぼ同様であった。