胎児神経系の発育分化過程におけるNerve Growth Factor(NGF)の意義に関する研究

神经生长因子（NGF）在胎儿神经系统发育分化过程中的意义研究

• 批准号: 62570767
• 负责人: 高橋 恒男
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 1989
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62570767/
• 关键词: Nerve Growth Factor(NGF); ヒト胎盤

Moblegらの方法に準じ部分精製した7-SNGF分画より, 酸性条件下で解離させたP-NGFをlon-change chromatographyで分離した. さらに塩濃度勾配により分離し, 凍結乾燥によりcrude placental NGFを抽出した. crude placental NGFの精製にはHPLCを使用し, 200gのヒト胎盤より, 7.5mgのcrade placental NGFが分離できた.生物学的活動の測定はLevi-Montalciuiらの方法に準じ次の様に行った. すなわち孵化8〜10日令のニワトリ胚脊髄後根神経節を用いたplasma clot法にて行った. ニワトリ血漿を含むメディウムをトロンビンで凝固させた後, 37°Cで24時間培養し, 神経節周囲から伸びる神経線維の密度を判定基準として活性の有無を判定した. placental NGFの生物活性は75〜750mg/mlで1 biological unitの反応であった.NGFのreceptor assagはニワトリ胚脊髄後根神経節, 培養マウスueuroblastoma cell lineのhomognateの両物を使用し, 125I-mouse NGFと各濃度のmouse-NGFあるいはヒト胎盤よりの抽出者をcoldをして使用し, 室温にて2時間インキュベートし, フィルターにてB・Fを分離することにより求めた. この方法により, 両者ともにNGF 1 ng/mlの感度を有する特異的結合を認めた. また, radio receptor assayでは低塩濃度の5〜6分の分画で, NGFは450ng/mlと最も高値を示した. つづいて11〜12分, 17〜18分の高塩濃度の分画においても, 前半より低いNGFのピークを認めた. しかし, ニワトリ胚を使用したbioassayでは低塩濃度には活性が見られたが高塩濃度では活性は明らかでなかった. 以上, 胎盤NGFの抽出精製を行ない, bioassay,receptor assayを検討し, 更に精製過程における分画中の活性を検討した.

The Mobleg method is used to prepare part of the standard 7-SNGF separation method. Under acidic conditions, it can be separated by P-NGF separation and lon-change chromatography separation. Please check the temperature to separate, dry and crude placental NGF to extract the spool. Crude placental NGF precision HPLC use, 200g fetal pregnancy, 7.5mg crade placental NGF isolation. Biological activity measurement Levi-Montalciui assay methods are used to determine the activity levels of biological activities. After hatching for 8-10 days, the embryo ridge was incubated for 8-10 days. After the embryo ridge was incubated, the plasma clot method was used. The blood samples were incubated at 37 °C for 24 hours after the blood samples were coagulated and incubated at 37 °C for 24 hours. Placental NGF bioactive 75~750mg/ ml1 biological unit anti-biodegradable. NGF